[1]贺贞,林东子,李观强,等.H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定[J].第三军医大学学报,2012,34(16):1691-1694.
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H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定(/HTML )
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《第三军医大学学报》[ISSN:1000-5404/CN:51-1095/R]

卷:
34卷
期数:
2012年第16期
页码:
1691-1694
栏目:
技术方法
出版日期:
2012-08-30

文章信息/Info

作者:
贺贞林东子李观强马卫列丁航张志珍
广东医学院生物化学与分子生物学教研室,东莞市慢性病防治院检验科;深圳市龙岗区人民医院检验科
关键词:
禽流感病毒NS1融合蛋白多克隆抗体
分类号:
R373.13;R392.7
文献标志码:
B
摘要:
目的      获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。      方法      利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价。      结果      SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4 h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%,融合蛋白的纯度达到90%以上。Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明,皮下注射25、50、100 μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P<0.01),其滴度达到1∶3 200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达。      结论      成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性。

参考文献/References:

贺贞, 林东子, 李观强, 等. H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定[J].第三军医大学学报,2012,34(16):1691-1694.

更新日期/Last Update: 2012-07-30