[1]周静,姜政,孙伟,等.人脂联素真核表达载体的构建及其表达[J].陆军军医大学学报(原第三军医大学学报),2009,31(14):1413-1414.
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人脂联素真核表达载体的构建及其表达(/HTML )
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陆军军医大学学报（原第三军医大学学报）[ISSN:1000-5404/CN:51-1095/R]

卷:
31卷
期数:
2009年第14期
页码:
1413-1414
栏目:
技术方法
出版日期:
2009-07-30

文章信息/Info

作者:
周静; 姜政; 孙伟; 陶小红; 黄爱龙; 王丕龙
重庆医科大学:附属第一医院消化内科,肝炎研究所；第三军医大学西南医院全军感染病研究所
关键词:
脂联素; 基因克隆; 基因治疗; 转染
分类号:
R394-33
文献标志码:
B
摘要:
目的   构建人脂联素的真核表达载体，并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。   方法   从人脂肪组织中提取总RNA，通过RT-PCR方法获得人脂联素基因，将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上，构建重组质粒pEGFP-N1-AdipoQ，转染至真核表达细胞COS-7中，并通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白在真核细胞中的表达。   结果   通过RT-PCR方法克隆人脂联素基因744 bp，测序结果显示，1个碱基发生突变，654位：A→T，突变率为0.1％，氨基酸Glu→Asp。通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白分子质量约为55×103（绿色荧光蛋白分子质量约为27×103），说明脂联素基因在真核细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合。   结论   成功的构建了真核表达载体，并在真核细胞中表达。

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更新日期/Last Update: 2009-06-29