[1]周静,姜政,孙伟,等.人脂联素真核表达载体的构建及其表达[J].第三军医大学学报,2009,31(14):1413-1414.
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人脂联素真核表达载体的构建及其表达(/HTML )
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《第三军医大学学报》[ISSN:1000-5404/CN:51-1095/R]

卷:
31卷
期数:
2009年第14期
页码:
1413-1414
栏目:
技术方法
出版日期:
2009-07-30

文章信息/Info

作者:
周静姜政孙伟陶小红黄爱龙王丕龙
重庆医科大学:附属第一医院消化内科,肝炎研究所;第三军医大学西南医院全军感染病研究所
关键词:
脂联素基因克隆基因治疗转染
分类号:
R394-33
文献标志码:
B
摘要:
目的   构建人脂联素的真核表达载体,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。   方法   从人脂肪组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得人脂联素基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-AdipoQ,转染至真核表达细胞COS-7中,并通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白在真核细胞中的表达。   结果   通过RT-PCR方法克隆人脂联素基因744 bp,测序结果显示,1个碱基发生突变,654位:A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp。通过SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白分子质量约为55×103(绿色荧光蛋白分子质量约为27×103),说明脂联素基因在真核细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合。   结论   成功的构建了真核表达载体,并在真核细胞中表达。

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更新日期/Last Update: 2009-06-29