[1]陈陵,李志宏,杨仕明,等.人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染[J].第三军医大学学报,2006,28(01):47-49.
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人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染(/HTML )
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《第三军医大学学报》[ISSN:1000-5404/CN:51-1095/R]

卷:
28卷
期数:
2006年第01期
页码:
47-49
栏目:
论著
出版日期:
2006-01-15

文章信息/Info

作者:
陈陵李志宏杨仕明李晶晶蔡永国房殿春罗元辉王东旭
第三军医大学西南医院全军消化内科中心
关键词:
肝素酶荧光真核表达载体转染
文献标志码:
A
摘要:
目的  构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6。方法  采用基因重组技术,用EcoRⅠ从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体, 并进一步测序确认。用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果。结果  经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成5.3 kb和1.7 kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5 kb和0.5 kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性。转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。结论  成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础。

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更新日期/Last Update: 2008-07-24