[1]王明海,王锋超,陆建华,等.发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究[J].第三军医大学学报,2004,26(08):0.[doi:10.16016/j.1000-5404.2004.08.001 ]
 WANG Ming hai,WANG Feng chao,LU Jian hua,et al.[J].J Third Mil Med Univ,2004,26(08):0.[doi:10.16016/j.1000-5404.2004.08.001 ]
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发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究(/HTML )
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《第三军医大学学报》[ISSN:1000-5404/CN:51-1095/R]

卷:
26卷
期数:
2004年第08期
页码:
0
栏目:
默认栏目
出版日期:
2004-04-30

文章信息/Info

作者:
王明海;王锋超;陆建华;麦跃;刘晓宏;程天民;粟永萍;
第三军医大学预防医学系全军复合伤研究所、创伤烧伤复合伤国家重点实验室;第三军医大学预防医学系全军复合伤研究所、创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400038;重庆400038;重庆400038;
Author(s):
WANG Ming hai WANG Feng chao LU Jian hua MAI Yue LIU Xiao hong CHENG Tian min SU Yong ping
State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Institute of Burns, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China
关键词:
NF-κBRNA干扰ECV304LPS
分类号:
R346
DOI:
10.16016/j.1000-5404.2004.08.001
摘要:
目的 采用RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)技术 ,通过构建人NF κBp65基因的特异性siRNA真核表达载体 ,体外观察对NF κB基因的沉默作用 ,以及对内毒素 (LPS)刺激后NF κB活性的调控作用。方法 采用基因克隆技术 ,将合成的发卡样特异性p65RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体 (pPUR U6) ,构建p65siRNA的表达载体 ,转染体外ECV 3 0 4细胞 ,48h后观测胞内NF κBp65亚单位蛋白水平 (Westernblotting)、及对LPS ( 10 μg ml)刺激后NF κB活化的抑制作用。结果 ①成功构建发卡样p65siRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体 (pPUR U6 p65siRNA) ;②pPUR U6 p65siRNA转染 (脂质体法 )ECV 3 0 4细胞 ,48h后明显下调胞内P65蛋白水平 ;③转染pPUR U6 p65siRNA的细胞 ,明显抑制LPS ( 10μg ml)刺激后NF κB的活化。 结论 该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放 ,进而抑制NF κB的活化 ,可望进一步抑制细胞的过度炎症反应 ,减轻创伤组织的受损程度 ,促进创伤后组织的修复

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备注/Memo

备注/Memo:
国家重点基础研究发展规划资助项目(“973”项目)(G1999054200)~~
更新日期/Last Update: 2004-04-30