0
文章快速检索  
高级检索
BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究
茆春国, 蒋莎莎, 范小青, 隆谭, 金花, 谭群友, 邓波     
400042 重庆,陆军军医大学大坪医院全军胸外科研究所
[摘要] 目的 本研究旨在探索乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1,p130cas)在肺癌发生发展中的生物功能与互作蛋白网络。方法 ① 免疫印迹实验(western blot)研究15对肺癌及癌旁组织中BCAR1表达情况,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)分析54例早期肺腺癌组织芯片中BCAR1与预后的关系,并通过TCGA数据库进一步验证。②通过CRISPR/Cas9分别构建人肺腺癌H1975,H1299 BCAR1敲除(knock out,KO)细胞株,通过调取cDNA文库构建A549过表达(overexpression,OE)细胞株,四唑盐比色实验(MTT)检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞存活能力。③免疫共沉淀质谱分析(immunoprecipitation mass spectrometry,IP-MS)联合生信分析找出工具细胞即293T细胞中BCAR1的互作蛋白网络及可能的关键节点。④western blot验证细胞系BCAR1-KO或BCAR1-OE后关键节点基因的表达变化,并在肺癌组织芯片中予以验证基因表达的相关性。结果 ① western blot:BCAR1在肺腺癌组织较癌旁组织显著高表达(P < 0.05);IHC:BCAR1高表达的早期肺癌患者预后差(HR=5.026,P=0.001),TCGA:BCAR1高表达肺腺癌患者预后差(HR=1.5,P=0.008 7)。②成功构建BCAR1-KO与BCAR1-OE稳定细胞株, 细胞增殖能力及细胞克隆形成率均随BCAR1敲除降低,过表达后升高。③IP-MS联合生信分析:哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8 (MLST8)可能作为BCAR1的关键互作蛋白; ④相比癌旁组织,MLST8在癌组织中高表达(P < 0.05), 并与BCAR1表达显著正相关(R=0.422 1,P=0.001 5)。细胞系中MLST8的表达在BCAR1敲除后降低,过表达后升高。结论 BCAR1在肺癌中发挥重要的促瘤效应。MLST8表达与BCAR1显著相关,可能是BCAR1的关键下游蛋白。
[关键词] 乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1    哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8    细胞增殖    细胞克隆形成    免疫共沉淀质谱分析    肺癌    
Promoting effect of breast cancer anti-estrogen resistance 1 on proliferation and growth of lung adenocarcinoma cells and potential networks of its interacting proteins
MAO Chunguo, JIANG Shasha, FAN Xiaoqing, LONG Tan, JIN Hua, TAN Qunyou, DENG Bo     
Institute of Thoracic Surgery, Daping Hospital, Army Medical University (Third Military Medical University), Chongqing, 400042, China
[Abstract] Objective To explore the biological functions of breast cancer anti-estrogen resistance 1 (BCAR1, also known as p130cas) in the incidence and development of lung cancer, and investigate the potential networks of its interacting proteins. Methods ① Western blotting was performed to study the expression of BCAR1 in 15 pairs of lung cancer tissues and para-cancerous normal tissues, and immunohistochemical (IHC) assay was carried out in paraffin-embedded tissues from 54 patients with early stage lung cancer in order to determine the relationship between BCAR1 level and prognosis. TCGA analysis was also performed as further validation. ②BCAR1 knockout (KO) cell lines were established in H1975 and H1299 lung cancer cells, respectively, using CRISPR/Cas9. And A549 cells with overexpression (OE) of BCAR1 were constructed by transfection of BCAR1 cDNA. MTT analysis and plate colony formation assay were used to detect the proliferation and viability of the cells, respectively. ③Immunoprecipitation mass spectrometry (IP-MS) along with bioinformatics analysis was employed to identify the key protein of BCAR1 interacting networks in 293T tool cells. ④The expression variations of the key node gene were confirmed in BCAR1-KO and BCAR1-OE cells using Western blotting, and the correlation between the key node gene and BCAR1 was verified in the lung cancer tissue microarray. Results ① The expression of BCAR1 was significantly higher in the lung cancer tissues than para-cancerous tissues (P < 0.05). Higher expression of BCAR1 was associated with worse prognosis in the patients with early-stage lung cancer (HR=5.026, P= 0.001) and TCGA cohort study (HR=1.5, P=0.008 7). ②BCAR1-KO and BCAR1-OE cells were successfully constructed, and the cell proliferation and colony formation were decreased with BCAR1-KO and increased following BCAR1-OE respectively. ③Mammalian lethal with SEC13 protein 8 (GβL, mLST8) was revealed to be a key protein of BCAR1 interacting network. ④MLST8 was significantly expressed at a higher level in the lung cancer tissues than the para-cancerous tissues (P < 0.05), and its expression was positively correlated with the expression of BCAR1 (R=0.422 1, P=0.001 5). Furthermore, the expression of MLST8 was decreased in BCAR1-KO cells and increased in BCAR1-OE cells. Conclusion BCAR1 plays a critical carcinogenetic role in lung cancer. MLST8 expression is significantly correlated with BCAR1, and may be a key downstream regulatory protein of BCAR1.
[Key words] BCAR1    mammalian lethal with SEC13 protein 8    cell proliferation    cell colony formation    immunoprecipitation mass spectrometry    lung cancer    

BCAR1是目前肿瘤研究的热点,其相对分子质量为130×103,是细胞外基质与胞内信号传导的桥梁分子:细胞与胞外基质接触后激活整合素→FAK激活并结合到BCAR1氨基端→磷酸化BCAR1羟基端→BCAR1与Src激酶结合→BCAR1活化→形成BCAR1/Crk复合体→Crk通路被激活[1-2]

研究表明,BCAR1高表达与多种癌症的细胞侵袭和转移相关:在前列腺癌中,BCAR1的高表达与肿瘤早期复发密切相关[3]。在子宫内膜腺癌中,BCAR1参与肿瘤细胞的生长和转移[4]。在口腔鳞癌中,BCAR1通过调节上皮-间质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)和细胞增殖促进骨侵袭和转移[5]。我们前期研究发现:BCAR1在肺癌组织中高表达,而在癌旁组织中低表达[6-7];开展的多中心临床研究证实肺癌BCAR1-mRNA及蛋白表达水平越高,患者预后越差[7]。而且,BCAR1高表达可诱导肺腺癌细胞发生EMT促进肺腺癌细胞迁移和侵袭[8-9]。所以,BCAR1有望成为肺癌精准治疗的分子靶点[10]

目前BCAR1研究多局限于肿瘤侵袭转移,较少聚焦细胞增殖和克隆形成。鉴于BCAR1基因促癌效应复杂,其相互作用蛋白研究较少,相关通路和网络尚不明确。本研究拟通过下调及上调BCAR1的表达及免疫共沉淀质谱分析,旨在深入探索上述问题。

1 材料与方法 1.1 材料

GV371载体,Cas9载体,CV146载体,GV141载体(均来自吉凯基因),H1975、H1299、A549、293T(ATCC),胎牛血清(Gibco, 10099141),胰酶(Gibco, 25200-056),BCAR1(CST,#13846),GAPDH(CST,#2118s),MLST8(CST,#3227),Rabbit IgG(Santa Cruz,sc-2004),嘌呤霉素(Clontech,631305),MTT(Solarbio,M8180),dsDNA oligo(吉凯基因,P212-03),2×Taq Plus Master Mix(Vazyme,M0318S),TOP10感受态(吉凯基因,R0539L),BbsI(sigma,D0281-59),T7 DNA Ligase(sigma,D4041),ATP(10 μmol/L)(Takara,DP11),Yeast Extract(OXOID),Agar Powder(OXOID,A-2180),Trizol试剂盒(上海普飞),1 kp DNA ladder Marker(Fermentas,#SM0311),250 bp DNA ladder Marker(捷瑞,DL250+, 100T),In-FusionTM PCR Cloning Kit(clontech,639626),Taq polymerase(SinoBio,E001-02B),dNTP(Takara,D4030A),Primer(捷瑞生物),限制性内切酶(NEB),Plasmid抽提Kit(Promega,A1460),X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent(Roche,06336236001)等。

1.2 病例来源

该研究方案经陆军军医大学大坪医院[TMMU-DPH]的研究伦理委员会审查和批准(2019-183),获得患者同意并签署知情同意书。收集胸外科2016年9月至2019年4月影像学诊断并经病理证实的早期肺腺癌患者54例,排除接受过治疗、患有重大基础疾病或其他恶性肿瘤患者,基线特征见表 1。获取54例蜡块癌组织,15对新鲜癌组织及远癌组织进行后续试验。

表 1 54例早期肺腺癌患者临床和病理特征
病例参数 统计量
男:女/例 24:30
年龄/岁 60.4±9.1
肿瘤大小/cm 2.3±0.7
分期(1a:1b)/例 46:8
生存时间/d 582.5±385.9

1.3 方法

1.3.1 western blot实验

研磨裂解组织细胞或提取细胞蛋白后BCA法测蛋白浓度,电泳,转膜,相应一抗1 :1 000稀释,孵二抗,ECL显影曝光,Image J软件(1.52a version.USA)进行蛋白条带半定量分析。

1.3.2 组织芯片制作及IHC实验

步骤详见文献[8]。将前述54例肺癌样本制作组织芯片,进行BCAR1(1 :50)及MLST8(1 :50)染色。Image J软件计算染色芯片平均光密度,进行相关性分析。

1.3.3 构建人肺腺癌细胞H1975、H1299 BCAR-KO稳定株

CRISPR/Cas9实验方案参见文献[11],简述如下:首先将CAS9载体(图 1A)转染H1975及H1299细胞,并通过2 μg/mL嘌呤霉素成功筛选H1975-CAS9及H1299-CAS9稳定株。依据GenBank ID(NM_001170714)的BCAR1序列设计BCAR1-sgRNA及阴性对照CON244-sgRNA干扰靶点序列(表 2),引物退火形成双链DNA,连入sgRNA载体GV371(图 1A),TOP10感受态转化,菌落PCR得到阳性克隆后测序鉴定。再将sgRNA慢病毒质粒转染H1975-CAS9、H1299-CAS9稳定细胞株,通过荧光鉴定构建的BCAR1-KO稳定细胞株后western blot验证BCAR1敲除效果。

A:载图谱体; B:早期肺腺癌及癌旁组织BCAR1表达,a: P < 0.05, 与癌旁组织比较;C:IHC示BCAR1表达;D:GEPIA数据库肺腺癌患者BCAR1生存分析;E:western blot验证肺腺癌细胞株BCAR1敲除与过表达,a: P < 0.05;b: P < 0.01,与NC组比较 图 1 肺腺癌患者BCAR1表达、预后分析及人肺腺癌细胞系BCAR1敲除与过表达构建

表 2 合成oligo以构建BCAR1 sgRNA
序号 序列5′-3′
BCAR1-sgRNA-a CACCgCAGCAACGGGTCTCGGCCAT
BCAR1-sgRNA-b aaac ATGGCCGAGACCCGTTGCTGc

1.3.4 构建人肺腺癌细胞A549 BCAR1-OE稳定株

根据GenBank ID(NM_001170714)的BCAR1基因序列设计引物如表 3,进行PCR扩增目的基因片段,PCR产物插入酶切载体CV146(图 1A)后进行转化,PCR法鉴定菌落并扩增抽提质粒。转染细胞后嘌呤霉素2 μg/mL药筛阳性细胞并扩增,western blot验证BCAR1过表达效果。

表 3 构建引物调取BCAR1 cDNA文库上调A549细胞中BCAR1表达
引物序号 序列
BCAR1(45429-1)-P1 AGGTCGACTCTAGAGGATCCCGCCACCATGCCTGCCAAGCCCTTCCTCTCTTCTG
BCAR1(45429-1)-P2 CACAGGCTAGCTCAACCGGTTCAGGCGGCTGCCAGCTGGCCTAGGACGCGG

1.3.5 MTT实验

0.25%胰酶消化对数生长期的细胞,制备单细胞悬液,按分组5 000/孔于96孔板接种,接种后0、24、48、72 h每孔加入20 μL MTT试剂(5 mg/mL),培养4 h,加入150 μL DMSO,震荡10 min,酶标仪490 nm测各孔吸光度值。

1.3.6 细胞平板克隆形成实验

0.25%胰酶消化对数生长期的细胞,制备单细胞悬液,按分组1 000/皿(10 cm)铺板,37 ℃,5% CO2培养箱培养,直至肉眼可见明显的细胞克隆形成,4%多聚甲醛固定细胞30 min,0.25%结晶紫染色细胞15 min,晾干,拍照,Image J软件分析。

1.3.7 IP-MS实验

依据BCAR1基因序列设计引物(表 4)钓取BCAR1,PCR扩增目的基因片段,产物与酶切载体GV141连接反应(图 1A),构建BCAR1过表达质粒并鉴定,质粒抽提,X-tremeGENE与过表达质粒以1 :1比例混合,转染293T细胞,24 h后换液,加入200 μg/mL G418进行药筛5 d获得293T细胞BCAR1过表达细胞株。提取细胞蛋白,BCA法测浓度,Shotgun法进行质谱分析,主要步骤如下:FASP酶解,QExactive质谱仪进行质谱分析,质谱文件转换获得数据。步骤详见文献[12],将获得的BCAR1-NC组蛋白与BCAR1-OE组蛋白进行比对分析。

表 4 构建引物调取BCAR1 cDNA文库上调293T细胞中BCAR1表达
引物序号 序列
BCAR1(55742-1)-P1 ACGGGCCCTCTAGACTCGAGCGCCACCATGCCTGCCAAGCCCTTCCTCTCTTC
BCAR1(55742-1)-P2 AGTCACTTAAGCTTGGTACCGAGGCGGCTGCCAGCTGGCCTAGGAC

1.3.8 生物信息学分析

TCGA数据库(https://www.cancer.gov/)查询与BCAR1表达显著正相关的基因。搜索限制条件:癌症类型:肺腺癌;位置:支气管、肺;分期:Stage ia,Stage ib;数据库选择:TCGA-LUAD;数据类型:Gene Expression Quantification;方法:RNA-Seq。选取FDR值< 10-6的BCAR1正相关基因与IP-MS结果比对分析,获取BCAR1互作蛋白。

将获得的基因输入PPI String数据库(https://string-db.org/)进行BCAR1信号通路分析,生成拥有多个节点的基因BCAR1信号通路图。

利用GEPIA在线工具(http://gepia.cancer-pku.cn/)对肺癌患者BCAR1基因进行生存分析,验证BCAR1与预后的关系;并获取的基因进行基因差异表达筛选,选取癌组织较癌旁组织显著高表达的基因研究。

1.4 统计学方法

采用IBM SPSS Statistics 26.0软件进行数据分析,统计数据以x±s形式表示,计量资料两样本比较使用独立t检验,相关性分析采用两变量相关分析,生存分析采用单因素cox回归模型,P < 0.05(双侧)具有统计学意义。

2 结果 2.1 肺腺癌组织中, BCAR1高表达预后不良

图 1B,western blot示相比癌旁组织,肺腺癌组织中BCAR1显著高表达(P < 0.05);如图 1C, IHC示BCAR1在肺癌细胞质及细胞核中均有表达,BCAR1高表达患者预后差(HR=5.026,P=0.001, 95%CI: 1.948~12.963),如图 1D示,TCGA数据库生存分析亦验证了肺癌患者BCAR1高表达其预后差(HR=1.5,P=0.008 7)。

2.2 人肺腺癌细胞H1975、H1299 BCAR1-KO以及A549BCAR1-OE稳定细胞株成功构建

图 1E,在H1975细胞株及H299中,BCAR1蛋白相对表达水平KO组细胞较NC组分别降低43.43% (P < 0.01)与33.57%(P < 0.05);在A549细胞株中,BCAR1蛋白相对表达OE组较NC组增加1.55倍(P < 0.05)。

2.3 肺癌细胞增殖能力BCAR1-KO后降低,而BCAR1-OE后升高

图 2,在H1975细胞株中,在24、72 h,KO组细胞增殖较NC组均显著降低(P < 0.000 1,P < 0.000 1);在H1299细胞株中,72 h KO组细胞增殖较NC组显著降低(P < 0.000 1);在A549细胞株中,在24、48、72 h,OE组细胞增殖较NC组均显著增加(P < 0.000 1,P < 0.001,P < 0.000 1)。

A:H1975;B:H1299;C:A549,a: P < 0.01;b: P < 0.001,与NC组比较 图 2 肺腺癌细胞系BCAR1敲除或过表达对细胞增殖的影响

2.4 细胞克隆形成率BCAR1-KO后降低,而BCAR1-OE后升高

图 3,在H1975细胞株中,细胞克隆形成率KO组细胞较NC组显著降低(P < 0.000 1);但在H1299细胞株中,趋势尚不明显(P>0.05);在A549细胞株中,细胞克隆形成率OE组细胞较NC组细胞显著增加(P < 0.000 1)。

A:细胞克隆形成结晶紫染色结果;B:细胞克隆形成率的比较, a: P < 0.001,与NC组比较;C:293T细胞BCAR1表达western blot验证, a: P < 0.001, 与NC组比较;D:免疫共沉淀质谱分析揭示419个潜在BCAR1作用蛋白; E:TCGA数据库揭示68个潜在BCAR1相互作用蛋白; F:PPI String数据库BCAR1互作蛋白网络分析 图 3 肺腺癌细胞系BCAR1敲除或过表达对克隆形成的影响及BCAR1的互作蛋白网络研究

2.5 IP-MS联合生信分析发现MSLT8为BCAR1的关键互作用蛋白

成功构建293T BCAR1过表达细胞株,BCAR1蛋白相对表达水平OE组细胞较NC组显著高表达(P < 0.001,图 3);并且IP-MS实验在293T细胞BCAR1-NC组获得2 813个蛋白(与标签蛋白互相作用),在BCAR1-OE组获得2 713个蛋白(与标签蛋白及BCAR1互相作用,表 5)。比对分析后得到419个蛋白(图 3)仅表达于BCAR1-OE组的潜在BCAR1互作蛋白通过TCGA数据库,得到2 479个与BCAR1表达显著正相关的基因比对分析后获得68个可能与BCAR1相互作用的基因(图 3)。

表 5 免疫共沉淀质谱分析结果
数据库 样品
类型
总肽段
数目
匹配到肽段的
质谱图谱总数
肽段数 蛋白
数目
293T-NC 29 387 17 587 13 604 2 813
293T-OE 28 021 15 823 12 884 2 713

通过PPI String数据库,从68个基因中获得18个拥有多节点的基因,获得信号通路图(图 3)。

GEPIA数据库的差异基因筛选显示,MSLT8,TAF7,GNB1LPTGES2,DHX37这5个基因在癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(图 4A)。图 3显示MLST8与BCAR1共同连接MAPK3。而我们的前期研究证实,BCAR1是参与MAPK信号通路的衔接蛋白[8],因此以MSLT8为重点进行后续验证。

A: GEPIA数据库差异基因表达筛选;B:western blot证实MLST8在肺腺癌组织显著高表达于癌旁正常组织, a: P < 0.05,与癌旁组织比较; C:IHC分析MLST8在肺腺癌组织中的表达情况; D:IHC检验BCAR1与MLST8的相关性; E:BCAR1敲除或过表达前后肺腺癌细胞株验证MLST8的表达情况,a: P < 0.01;b: P < 0.001, 与NC组比较 图 4 临床样本组织和细胞水平验证BCAR1与MLST8的表达关系

2.6 在肺癌细胞及组织中MLST8与BCAR1表达密切相关

图 4B,在肺腺癌组织中,MLST8表达癌组织较癌旁组织显著高表达(P < 0.000 1);如图 4C,IHC示MLST8主要表达于细胞质;如图 4D,BCAR1与MLST8相关性分析显示BCAR1与MLST8具有显著正相关性(R=0.422 1,P=0.001 5)。

2.7 细胞水平western blot验证BCAR1与MLST8表达关系

图 4E,在H1975, H1299人肺腺癌细胞株中,BCAR1-KO后MLST8蛋白表达显著降低(P < 0.001,P < 0.01),在A549细胞株中,BCAR1-OE后MLST8蛋白表达显著增高(P < 0.01)。

3 讨论

本研究发现,BCAR1在早期肺癌中亦高表达,且与预后不良密切相关,此结论与乳腺癌的研究结论类似[13]。研究揭示,BCAR1高表达与多种癌症的细胞增殖、存活密切相关[14],特别在乳腺癌中报道较多,而对肺癌细胞增殖及细胞克隆形成的影响却鲜有关注。我们研究发现,在肺癌细胞株中敲除或过表达BCAR1,细胞增殖及克隆形成能力显著降低或增高。在H1299细胞株中,虽然BCAR1敲除未影响克隆形成,考虑与BCAR1在H1299中敲除效果稍差所致,亦有可能在不同细胞背景下,BCAR1生物学功能有所差异。结合A549细胞中BCAR1过表达后,细胞增殖与克隆形成显著增加,我们认为,BCAR1在肺癌的细胞增殖、存活与克隆形成上发挥着重要的作用。

通过IP-MS结合生信分析,我们找到了几个潜在BCAR1互作蛋白,MSLT8、TAF7、GNB1L、PTGES2、DHX37。这些基因在癌组织中表达显著高于正常组织。前期研究显示,磷酸化BCAR1羟基端使得BCAR1与Src激酶结合[15-16],增强Src介导的p130cas和PI3K-AKT-mTOR信号级联反应,MMPs表达增加,促进肿瘤转移[17-18]。MLST8作为一类激酶,在基因注释上与BCAR1功能有很多相似之处。MLST8是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的结合蛋白,为激酶激活必不可少的一部分,由它们构成的复合物结构显示:MLST8可以稳定mTOR的活性位点,其表达水平上调激活mTORC1和mTORC2通路而促进肿瘤进展[19-20]。体外研究表明:PSMA与phospho-p130cas、phospho-c-Src中的FLNa结合,激活AKT/mTOR/BAD和MAPK途径,维持细胞的增殖和抗凋亡作用[21]。而我们从PPI String获得的信号通路中显示,BCAR1与MLST8紧邻着MAPK3相连接,而我们课题组前期研究证实BCAR1是参与MAPK信号通路的衔接蛋白[8],故MLST8被作为BCAR1的关键互作蛋白进行研究。

本研究通过临床与细胞水平证实,BCAR1与MLST8显著相关,MLST8随着BCAR1的变化在细胞水平出现相应的趋势变化,在BCAR1敲除后低表达,在BCAR1过表达后高表达,揭示MLST8可能为BCAR1互作的下游调节蛋白。但是,BCAR1与MLST8发生作用的具体机制仍不清楚。下一步,我们将通过免疫共沉淀或Duolink PLA实验研究BCAR1与MLST8相互关系,以及调控MLST8对于BCAR1功能的影响。总之,BCAR1及MLST8有望成为肺癌治疗的新靶点。

参考文献
[1]
SAWADA Y, TAMADA M, DUBIN-THALER B J, et al. Force sensing by mechanical extension of the Src family kinase substrate p130Cas[J]. Cell, 2006, 127(5): 1015-1026. DOI:10.1016/j.cell.2006.09.044
[2]
GEIGER B. A role for p130Cas in mechanotransduction[J]. Cell, 2006, 127(5): 879-881. DOI:10.1016/j.cell.2006.11.020
[3]
HEUMANN A, HEINEMANN N, HUBE-MAGG C, et al. High BCAR1 expression is associated with early PSA recurrence in ERG negative prostate cancer[J]. BMC Cancer, 2018, 18(1): 37. DOI:10.1186/s12885-017-3956-3
[4]
YIN X Y, YANG X, CUI Y, et al. Expression of three proteins in endometrioid adenocarcinoma and their significance in clinical nursing, diagnosis and treatment[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2018, 22(1): 55-61. DOI:10.26355/eurrev_201801_14100
[5]
YAGINUMA T, GAO J, NAGATA K, et al. p130Cas induces bone invasion by oral squamous cell carcinoma by regulating tumor epithelial-mesenchymal transition and cell proliferation[J]. Carcinogenesis, 2020, 41(8): 1038-1048. DOI:10.1093/carcin/bgaa007
[6]
DENG B, HUANG W, TAN Q Y, et al. Breast cancer anti- estrogen resistance protein 1 (BCAR1/p130cas) in pulmonary disease tissue and serum[J]. Mol Diagn Ther, 2011, 15(1): 31-40. DOI:10.1007/BF03257191
[7]
DENG B, SUN Z F, JASON W, et al. Increased BCAR1 predicts poor outcomes of non-small cell lung cancer in multiple- center patients[J]. Ann Surg Oncol, 2013, 20(Suppl 3): S701-S708. DOI:10.1245/s10434-013-3184-2
[8]
HUANG W, DENG B, WANG R W, et al. BCAR1 protein plays important roles in carcinogenesis and predicts poor prognosis in non-small-cell lung cancer[J]. PLoS ONE, 2012, 7(4): e36124. DOI:10.1371/journal.pone.0036124
[9]
DENG B, TAN Q Y, WANG R W, et al. P130cas is required for TGF-β1-mediated epithelial-mesenchymal transition in lung cancer[J]. Oncol Lett, 2014, 8(1): 454-460. DOI:10.3892/ol.2014.2123
[10]
GEMPERLE J, DIBUS M, KOUDELKOVA L, et al. The interaction of p130Cas with PKN3 promotes malignant growth[J]. Mol Oncol, 2019, 13(2): 264-289. DOI:10.1002/1878-0261.12401
[11]
HUDACSEK V, GYORFFY B. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system and applications in cancer research[J]. Magy Onkol, 2018, 62(2): 119-127.
[12]
MACCARRONE G, BONFIGLIO J J, SILBERSTEIN S, et al. Characterization of a protein interactome by Co-immunoprecipitation and shotgun mass spectrometry[J]. Methods Mol Biol, 2017, 1546: 223-234. DOI:10.1007/978-1-4939-6730-8_19
[13]
GEMPERLE J, HEXNEROVÁ R, LEPŠÍK M, et al. Structural characterization of CAS SH3 domain selectivity and regulation reveals new CAS interaction partners[J]. Sci Rep, 2017, 7(1): 8057. DOI:10.1038/s41598-017-08303-4
[14]
CAMACHO LEAL M D P, COSTAMAGNA A, TASSONE B, et al. Conditional ablation of p130Cas/BCAR1 adaptor protein impairs epidermal homeostasis by altering cell adhesion and differentiation[J]. CellCommun Signal, 2018, 16(1): 73. DOI:10.1186/s12964-018-0289-z
[15]
CAMACHO LEAL M D E L P, SCIORTINO M, TORNILLO G, et al. p130Cas/BCAR1 scaffold protein in tissue homeostasis and pathogenesis[J]. Gene, 2015, 562(1): 1-7. DOI:10.1016/j.gene.2015.02.027
[16]
RADULOVIĆC P, KRUŠLIN B. Immunohistochemical expression of NEDD9, E-cadherin and γ-catenin and their prognostic significance in pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC)[J]. Bosn J Basic Med Sci, 2018, 18(3): 246-251. DOI:10.17305/bjbms.2018.2378
[17]
TOMITA Y, DORWARD H, YOOL A J, et al. Role of aquaporin 1 signalling in cancer development and progression[J]. Int J Mol Sci, 2017, 18(2): E299. DOI:10.3390/ijms18020299
[18]
PALLARÈS V, HOYOS M, CHILLÓN M C, et al. NEDD9, an independent good prognostic factor in intermediate- risk acute myeloid leukemia patients[J]. Oncotarget, 2017, 8(44): 76003-76014. DOI:10.18632/oncotarget.18537
[19]
YU X N, ZHANG G C, SUN J L, et al. Enhanced mLST8 expression correlates with tumor progression in hepatocellular carcinoma[J]. Ann Surg Oncol, 2020, 27(5): 1546-1557. DOI:10.1245/s10434-020-08263-6
[20]
XU Y Q, HUANG Y N, WENG L H, et al. Effects of single-nucleotide polymorphisms in the mTORC1 pathway on the risk of brain metastasis in patients with non-small cell lung cancer[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2020, 146(1): 273-285. DOI:10.1007/s00432-019-03059-y
[21]
PERICO M E, GRASSO S, BRUNELLI M, et al. Prostate-specific membrane antigen (PSMA) assembles a macromolecular complex regulating growth and survival of prostate cancer cells "in vitro" and correlating with progression "in vivo"[J]. Oncotarget, 2016, 7(45): 74189-74202. DOI:10.18632/oncotarget.12404
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.202007249
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

文章信息

茆春国, 蒋莎莎, 范小青, 隆谭, 金花, 谭群友, 邓波
MAO Chunguo, JIANG Shasha, FAN Xiaoqing, LONG Tan, JIN Hua, TAN Qunyou, DENG Bo
BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究
Promoting effect of breast cancer anti-estrogen resistance 1 on proliferation and growth of lung adenocarcinoma cells and potential networks of its interacting proteins
第三军医大学学报, 2020, 42(24): 2366-2374
Journal of Third Military Medical University, 2020, 42(24): 2366-2374
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.202007249

文章历史

收稿: 2020-07-31
修回: 2020-09-28

相关文章

工作空间