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血清IgG及IgG4检测在ANCA相关性血管炎中的诊断价值
秦陈浩, 顾爱萍, 展富琴, 冯萍, 顾昊宇, 何春燕, 杨顺     
215004 江苏 苏州,苏州大学附属第二医院检验科
[摘要] 目的 研究分析血清IgG及IgG4在ANCA相关性血管炎(AAV)患者中的表达,探讨IgG4在AAV中的诊断价值。方法 收集本院就诊的AAV患者血清48例为患者组,同期健康人血清25例作为对照组,用ELISA法检测IgG4浓度,免疫比浊法检测IgG浓度,船式ELISA法检测抗髓过氧化物酶抗体(anti-MPO)和抗蛋白酶3抗体(anti-PR3)浓度,两组数据间比较用t检验,多组数据用单因素方差分析,两两间比较用LSD-t检验,两组间指标相关性分析用Pearson相关性分析,以P < 0.05为差异有统计学意义。结果 AAV患者组血清IgG4浓度为(1.17±0.58)g/L,IgG4/IgG为(10.12±6.64)%,明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P < 0.01);MPO-ANCA相关性AAV和PR3-ANCA相关性AAV患者组的血清IgG4浓度及IgG4/IgG较健康对照组均有明显升高(P < 0.01),但两个亚型之间的IgG4表达没有差异(P>0.05),ANCA浓度与IgG4浓度也没有明显相关性(P>0.05)。结论 AAV或其亚型患者的IgG4浓度及IgG4/IgG均有明显升高,但与ANCA的类型及其浓度没有明显相关性,IgG4联合ANCA检查有助于AAV的诊断。
[关键词] IgG4     IgG4相关疾病     ANCA相关性血管炎     抗髓过氧化物酶抗体     抗蛋白酶3抗体    
Diagnostic value of serum IgG and IgG4 in antineutrophil cytoplasmic antibody associated vasculitis
QIN Chenhao, GU Aiping, ZHAN Fuqin, FENG Ping, GU Haoyu, HE Chunyan, YANG Shun     
Department of Medical Laboratory, the Second Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou, Jiangsu Province, 215004, China
[Abstract] Objective To investigate the expression of serum IgG and IgG4 in the patients with antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-associated vasculitis (AAV), and explore the diagnostic value of IgG4 in AAV patients. Methods A total of 48 patients with AAV admitted in our hospital from July 2016 to June 2018 were recruited as patient group, and 25 healthy persons during the same period were subjected as control group. Their serum samples were collected for concentration of IgG4 by ELISA, that of IgG by immunoturbidimetric assay, and those of anti-MPO and anti-PR3 antibodies by ship type ELISA. Student's t test was used to make data comparison between the 2 groups, one-way ANOVA was employed for comparison among the multiple groups, and LSD-t test was applied for intragroup comparison. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between the 2 groups, and P < 0.05 was considered statistically. Results The serum IgG4 concentration was 1.17±0.58 g/L, and the percentage of IgG4 to IgG was (10.12±6.64)% in the AAV patients, which were significantly higher than those of healthy individuals (P < 0.01). So were the concentrations in the MPO-ANCA-associated and PR3-ANCA-associated AAV patients (P < 0.01). But there was no difference in the expression of IgG4 between the 2 subtypes (P>0.05), and there was no significant correlation between ANCA concentration and IgG4 concentration (P>0.05). Conclusion IgG4 concentration and IgG4/IgG percentage are significantly increased in the patients with AAV or its subtypes. But there is no significant correlation with the types and ANCA concentration. Detection of IgG4 combined with ANCA is helpful in the diagnosis of AAV.
[Key words] IgG4     IgG4-related diseasse     antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis     anti-MPO antibody     anti-PR3 antibody    

AAV属原发性小血管炎,因部分疾病与抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)密切相关,因而称之为ANCA相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV),ANCA是AAV的标志性自身抗体,它是抗中性粒细胞胞浆抗体的总称,ANCA通常按照其靶抗原的不同来分类,CHCC 2012分类标准依据ANCA的类型将AAV再细分为3类:MPO-ANCA相关性AAV、PR3-ANCA相关性AAV、ANCA阴性AAV[1],酶免法、免疫印迹法、免疫荧光法是目前检测ANCA主要方法,但仍有少部分AAV患者无法检出ANCA,原因可能是存在目前常规方法无法检测到的ANCA,也可能是存在尚未发现的特异性ANCA。另外,AAV患者在接受激素或免疫抑制剂治疗后其ANCA浓度会降低甚至转阴,这对疾病的诊断会带来一些困难。IgG4相关疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)是近年来新发现的一组疾病,2010年才统一命名为IgG4-RD,临床上较多采用的诊断要素是:血清IgG4浓度大于1.35 g/L,病损组织中IgG4阳性细胞/IgG阳性细胞大于40%[2]。国内、外有个例报道称AAV患者血清中IgG4也有明显升高[3, 4],病理检查显示局部组织也有IgG4+浆细胞浸润,本实验中我们将通过收集AAV患者血清,定量检测IgG4和及计算IgG4/IgG值,研究分析血清IgG4在AAV患者中的表达情况,探讨其在AAV中的诊断价值。

1 材料与方法 1.1 研究对象

收集2016年7月至2018年6月于苏州大学附属第二医院接受治疗的AAV患者48例,其中男性19例,女性29例,年龄(28~88)岁,其中MPO-ANCA相关性AAV患者31例,PR3-ANCA相关性AAV患者14例,ANCA阴性AAV患者3例,所有AAV患者临床表现符合2012年Chapel Hill共识会议(Chapel Hill consensus conference,CHCC)的血管炎分类标准[5]。健康对照组为同期25名健康体检者,其中男性10例,女性15例,年龄(17~65)岁,患者均排除急慢性感染和风湿免疫性疾病,研究遵循的程序符合医学伦理委员会所制定的伦理学标准,并获得该委员会的批准,标本的采集均在获得受试者知情同意后完成。

1.2 实验方法

1.2.1 仪器与试剂 1.2.1.1 主要仪器

离心机为安徽中科中佳科学仪器有限公司,TECAN Sunrise酶标仪为瑞士帝肯公司产品,SIEMENS全自动蛋白分析仪为德国西门子公司产品,Union免疫分析仪为深圳亚辉龙生物科技股份有限公司产品、37℃恒温孵育箱、移液器等。

1.2.1.2 试剂材料

IgG4 ELISA检测试剂盒为艾莱萨生物科技(上海)有限公司产品,IgG检测试剂盒为西门子医疗系统有限公司产品,anti-MPO试剂盒和anti-PR3试剂盒为深圳亚辉龙生物科技股份有限公司产品。

1.2.2 方法和步骤

IgG4的测定检测采用ELISA法,在预先包被抗IgG4抗体的微孔中,依次加入标准物、标本、HRP标记的二抗,经过温育后洗涤,用底物TMB显色,显色后用硫酸终止,颜色的深浅和样品中的IgG4浓度成正比,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),再根据标准品拟合回归曲线并计算出样本血清中IgG4浓度。血清IgG浓度测定采用免疫散射比浊法在SIEMENS全自动蛋白分析仪上自动完成。anti-MPO浓度和anti-PR3浓度在亚辉龙Union免疫分析仪上自动测定完成。

1.3 统计学分析

数据分析采用SPSS 17.0统计软件,计量资料以x±s表示,两组数据间比较用t检验,多组数据用单因素方差分析,两两间比较用LSD-t检验,两组间指标相关性分析用Pearson相关性分析,以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 血清IgG、IgG4浓度及IgG4/IgG比值

AAV患者组IgG4浓度为(1.17±0.58)g/L,明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P < 0.01),AAV患者组IgG4/IgG为(10.12±6.64)%,IgG4占IgG百分比明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P < 0.01),见表 1

表 1 AAV患者组和健康对照组IgG、IgG4浓度及IgG4/IgG百分比值
分组 n IgG/g·L-1 IgG4/g·L-1 IgG4/IgG(%)
AAV患者组 48 13.56±5.04 1.17±0.58a 10.12±6.64a
健康对照组 25 13.59±1.45 0.55±0.31 4.15±2.47
t -0.270 4.797 4.238
P 0.979 0.000 0.000
a:P < 0.01, 与健康对照组比较

2.2 MPO-ANCA相关性AAV患者与PR3-ANCA相关性AAV患者IgG、IgG4浓度及IgG4/IgG比值

48例AAV患者中MPO-ANCA相关性AAV为31例,IgG4浓度为(1.07±0.53)g/L,IgG4/IgG为(10.53±7.68)%、PR3-ANCA相关性AAV为14例,IgG4浓度为(1.38±0.65)g/L,IgG4/IgG为(9.21±3.43)%,分析表明IgG4及IgG4/IgG均高于健康对照组(P < 0.05),但两组AAV亚型内没有明显差异(P>0.05),因ANCA阴性AAV仅为3例,例数太少未纳入统计比较,见表 2

表 2 MPO-ANCA相关性AAV与PR3-ANCA相关性AAV患者IgG、IgG4浓度及IgG4/IgG结果
病种 n IgG/g·L-1 IgG4/g·L-1 IgG4/IgG(%)
MPO-ANCA相关性AAV 31 13.77±4.85 1.07±0.53a 10.53±7.68a
PR3-ANCA相关性AAV 14 13.10±5.61 1.38±0.65a 9.21±3.43a
健康对照组 25 13.59±1.45 0.55±0.31 4.15±2.47
F 2.649 13.119 9.047
P 0.078 0.000 0.000
a:P < 0.01, 与健康对照组比较

2.3 anti-MPO和anti-PR3浓度与IgG4浓度相关性分析

MPO-ANCA相关性AAV患者anti-MPO浓度与IgG4含量(r=0.155,P=0.405)和PR3-ANCA相关性AAV患者anti-PR3与IgG4含量(r=-0.292,P=0.311)均没有明显相关性(图 1)。

A: anti-MPO, B: anti-PR3 图 1 anti-MPO和anti-PR3浓度与IgG4浓度相关性分析

3 讨论

本实验中AAV或其亚型患者的IgG4浓度及IgG4占总IgG的比例均明显高于健康对照组,ANCA阴性AAV因例数较少,未进行统计比较,但IgG4浓度也有明显升高。AAV是西方国家最常见的自身免疫性疾病之一,也是近10~20年来国内、外研究的热点,本病临床特点是发热、贫血、肺和肾功能损害、血沉增快等,根据组织病理学特点将AAV分为显微镜下多血管炎(MPA)、肉芽肿性多血管炎(GPA)、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA)和单器官AAV[5]。ANCA是AAV重要的血清学诊断依据,研究表明,根据ANCA特异性而非临床诊断对AAV进行分类可以传达更有用的临床诊断信息[6],GPA患者主要为anti-PR3阳性,而MPA患者主要为anti-MPO阳性,GPA在欧美多见[7],而在我国则以anti-MPO阳性的MPA为主,与报道相同,本文收集的病例MPO-ANCA相关性AAV占总AAV近70%,这种差别被认为是由于ANCA亚型的地域差别造成的[8]。我们注意到,ANCA阴性AAV患者中尚无标志性自身抗体,需要进一步组织学和影像学检查,另外,患者在接受激素和免疫抑制剂治疗后ANCA浓度会降低甚至转阴,可能会导致漏诊、误诊,Sakairi T等报道一例ANCA阴性肾小血管炎合并IgG4阳性浆细胞间质浸润,此患者血清IgG4明显升高[9],本实验结果表明在AAV中IgG4的也升高明显,但升高幅度不及IgG4-RD,且与ANCA的浓度和类型均无明显相关性,于峰等人的研究也表明IgG4浓度升高与AAV病情不同步[10],血清IgG4在AAV患者中升高不易受ANCA影响,这一特征可以弥补ANCA不能检出时AAV的诊断,尤其在ANCA阴性AAV患者中更有诊断价值。

正常情况下健康人IgG4仅占总IgG的3%~6%,主要通过旁路途径激活补体,可以通过胎盘,且对于靶抗原亲和力较低,高表达的Th2型细胞因子包括IL-4,IL-5,IL-10和IL-13能同时伴高浓度的IgG4被检出[11-12],IL-4是负责驱动Th2应答的主要细胞因子[13],它最先被认为是诱导IgG4应答的主要细胞因子[14]。KUROKI等[15]发现,当有Th2细胞因子特别是IL-4存在时,特发性膜性肾病患者IgG4的表达显著升高,同时IL-6对IgG4的升高也有促进作用[16]。研究还表明由Th2细胞分泌IL-21在IgG4-RD患者淋巴结中生发中心的形成和IgG向IgG4亚型的类别转化中发挥关键作用[17],另一项有报道称体外试验中刺激CD148+和CD148- B淋巴细胞,结果表明IgG4主要由CD148-B淋巴细胞产生[18]。AAV患者血清IgG4升高可能就在相关自身抗体、细胞因子和淋巴细胞相互作用下造成的,虽然不是一个特异性的抗体,但是在AAV中有明显升高,联合ANCA检查可以作为AAV的一个较好辅助诊断指标,IgG4在对疾病有无保护作用,还是只是炎症反应副产物需要进一步深入研究和积累更多临床资料。

IgG4是一个独特的免疫球蛋白亚型,本研究中AAV或其亚型患者血清IgG4浓度明显升高,且浓度升高与ANCA类型及浓度无明显相关性,因此,联合IgG4和ANCA检测有助于AAV的诊断,尤其是在ANCA阴性的AAV中更具有诊断价值。

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http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201902006
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由第三军医大学主管、主办

文章信息

秦陈浩, 顾爱萍, 展富琴, 冯萍, 顾昊宇, 何春燕, 杨顺.
QIN Chenhao, GU Aiping, ZHAN Fuqin, FENG Ping, GU Haoyu, HE Chunyan, YANG Shun.
血清IgG及IgG4检测在ANCA相关性血管炎中的诊断价值
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第三军医大学学报, 2019, 41(15): 1497-1500
Journal of Third Military Medical University, 2019, 41(15): 1497-1500
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201902006

文章历史

收稿: 2019-02-02
修回: 2019-04-27

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