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线粒体转录因子A在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达及其意义
刘威, 宁禹, 陈思, 周婉怡, 刘焱, 包斌霞, 张明满     
400014 重庆,重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿科学重庆市重点实验室,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地
[摘要] 目的 探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A, mtTFA)在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达情况及可能的调控机制。方法 收集患儿肝脏标本并统计其临床资料;构建由甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid, GCDCA)诱导的人正常肝细胞(L02)胆汁淤积模型;HE染色检测患儿肝脏的形态学改变;Real-time PCR、qRT-PCR测定患儿肝细胞线粒体DNA(mitochondral DNA, mtDNA)拷贝数和转录水平以及mtTFA和沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulator 2 homolog 1, SIRT1)通路相关mRNA水平的变化;Western blot测定mtTFA和SIRT1通路相关蛋白水平的变化。结果 统计病例资料结果显示,黄疸组肝功较对照组明显下降(P < 0.000 1);HE染色结果显示,黄疸组肝细胞形态结构紊乱,胆色素沉积,内见胆汁淤积;Real-time PCR、qRT-PCR结果显示,黄疸组肝细胞mtDNA拷贝数与转录水平显著下降(P < 0.01),mtTFA、SIRT1和氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α, PGC-1α)mRNA水平明显降低(P < 0.05);Western blot检测结果显示,黄疸组肝细胞、GCDCA诱导的L02细胞中mtTFA与SIRT1蛋白水平均显著下降(P < 0.01),而PGC-1α差异无统计学意义(P>0.05),SRT1720激动SIRT1后mtTFA蛋白的表达较前明显升高(P < 0.05)。结论 mtTFA在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达显著下降,SIRT1信号通路可能对mtTFA的表达具有调控作用。
[关键词] 婴儿     胆汁淤积     肝细胞     线粒体转录因子A     沉默信息调节因子2相关酶类1    
Expression and significance of mitochondrial transcription factor A in hepatocytes of infants with cholestatic jaundice
LIU Wei, NING Yu, CHEN Si, ZHOU Wanyi, LIU Yan, BAO Binxia, ZHANG Mingman     
Department of Hepatobiliary Surgery, Key Laboratory of Child Development and Disorders of Ministry of Education, Chongqing Key Laboratory of Pediatrics, China International Science and Technology Cooperation Base of Child Development and Critical Disorders, Children's Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing, 400014, China
[Abstract] Objective To investigate the expression of mitochondrial transcription factor A (mtTFA) in hepatocytes of infants with cholestatic jaundice and explore the possible regulatory mechanism. Methods The liver samples and clinical data of the infants with cholestatic jaundice were collected; The cholestatic model of glycochenodeoxycholic acid (GCDCA)-induced human normal hepatocyte (L02) was constructed. HE staining was used to detect morphological changes of the liver tissues. Real-time PCR and qRT-PCR were adopted to detect the mitochondral DNA (mtDNA) copy number and transcription level, and mRNA levels of mtTFA and silent mating type information regulator 2 homolog 1 (SIRT1) pathway-related genes. Western blotting was used to measure the protein levels of mtTFA and SIRT1 pathway-related proteins. Results Clinical statistics presented that liver function of the jaundice group was significantly lower than that of control group (P < 0.000 1). HE staining showed that the jaundice group had hepatocyte morphology disorder, bile pigmentation and intracellular cholestasis. The results of real-time PCR and qRT-PCR demonstrated that the mtDNA copy number and the transcriptional level of mtDNA in the hepatocytes were significantly lower in jaundice group (P < 0.01), and the mRNA levels of mtTFA, SIRT1 and peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α (PGC-1α) were significantly decreased in jaundice group (P < 0.05); Western blot analysis showed that the protein levels of mtTFA and SIRT1 were significantly decreased in the liver tissues of the jaundice group and GCDCA-induced L02 cells (P < 0.001), but that of PGC-1α had no statistical difference (P>0.05). Treatment with SIRT1 agonist SRT1720 resulted in increased expression level of mtTFA protein (P < 0.05). Conclusion The expression level of mtTFA is obviously decreased in hepatocytes of infants with cholestatic jaundice, and SIRT1 signaling pathway may play a regulatory role in its expression.
[Key words] infants     cholestasis     hepatocytes     mitochondrial transcription factor A     silent mating type information regulator 2 homolog 1    

胆汁淤积性黄疸是目前我国婴儿期的常见疾病,国外文献报道活产婴儿发生率为1 :5 000~1 :2 500[1],国内缺乏相应的流行病学资料,但普遍认为其发病率明显高于西方国家。它以胆汁酸和直接胆红素升高为主,常见于胆道闭锁、胆汁淤积症、胆道狭窄、胆石症等,导致胆汁流出受阻,胆汁积聚肝内,疏水性的胆汁酸(毒胆酸)引起肝细胞凋亡和坏死,长此以往可导致肝纤维化和硬化[2-3]

目前,有关胆汁淤积损伤肝细胞机制尚不明确。研究表明,胆汁淤积诱发的肝损伤可能与线粒体功能障碍相关,毒胆酸诱导活性氧(reactive oxygen species, ROS)产生,损伤线粒体DNA(mitochondral DNA, mtDNA),诱导线粒体凋亡和坏死[4-5]。线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A, mtTFA)对mtDNA有保护作用,它能与mtDNA结合,对维持mtDNA空间构象,调节其复制、转录及损伤修复具有重要作用[6]。在毒胆酸诱导的氧化应激中,沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulator 2 homolog 1, SIRT1)信号通路能够调节多个抗氧化程序表达,提高抗氧化酶类的抗氧化能力并减少ROS的生成,从而发挥抗氧化作用[7-8]。目前尚无对婴儿黄疸中mtTFA的研究,且对调控mtTFA的机制也尚不明确。本研究旨在检测mtTFA在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达情况,并探讨其可能的调控机制,为探索胆汁淤积肝细胞损伤机理奠定基础。

1 资料与方法 1.1 病例资料与标本收集

收集2017年6月至2018年9月重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科胆汁淤积性黄疸25例,男性14例,女性11例,年龄(2.6±0.7)个月,包括胆道闭锁15例、胆汁淤积症7例、胆道狭窄3例。对照组10例,男性4例,女性6例,年龄(9.2±1.6)个月,其中包括胆总管囊肿7例,肝外伤3例。纳入标准:年龄<1岁,黄疸组:总胆汁酸>80 μmol/L,总胆红素>85.5 μmol/L,直接胆红素占总胆红素50%以上;对照组:总胆汁酸<20 μmol/L,总胆红素<17.1 μmol/L,两组均无肝脏原发疾病。排除标准:年龄>1岁,肝功结果不符合纳入标准,含有其他肝脏原发疾病或诊断不明的病例。患儿临床资料均来自重庆医科大学附属儿童医院病案室数据库,患儿肝脏标本均由重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科主刀医师术中切取,切取部位均为肝右叶前缘,所取标本大小约为0.4 cm×0.4 cm×0.4 cm,于多聚甲醛溶液或-80 ℃冰箱保存。本研究获得重庆医科大学附属儿童医院伦理委员会批准,批件号为:(2018)年伦审(研)第(133)号,遵循伦理学要求,研究对象监护人均知情同意并书面签字。

1.2 L02细胞培养

人正常肝细胞(L02)由重庆医科大学附属儿童医院儿研所公共平台提供。L02用DMEM培养基(含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素)于37 ℃、5%CO2条件下培养,至对数生长期进行实验。

1.3 主要试剂与器材

全蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒来自凯基生物有限公司,mtTFA小鼠单克隆抗体、SIRT1、PGC-1α兔多克隆抗体于美国Proteintech公司购得,羊抗小鼠、羊抗兔二抗均来自中杉金桥生物有限公司,逆转录试剂盒、SYBR Green荧光染料均购自日本TaKaRa公司,胎牛血清、胰蛋白酶购自美国Gibco公司,SRT1720购买于Selleck公司,GeneSnap凝胶成像系统来自美国Syn Gene公司,PCR反应仪、实时荧光定量PCR反应仪从美国Bio-Rad公司购买,组织脱水系统、组织切片机从德国Leica公司购取,离心机在美国Pro200公司购买,光学显微镜来自日本Nikon公司。

1.4 实验方法

1.4.1 观察肝脏组织形态学变化

取经多聚甲醛固定后的两组肝脏标本,按步骤对石蜡切片进行HE染色,光学显微镜下观察肝脏组织的形态学改变。

1.4.2 Real-time PCR检测

使用天根公司的TIANamp Genomic DNA Kit提取肝脏总DNA,以DNA为模板进行Real-time PCR实验,设计mtDNA编码的基因(COX1)引物,通过检测目标基因的表达,间接反映mtDNA的拷贝数。

1.4.3 qRT-PCR检测

严格按照逆转录试剂盒说明将提取的RNA逆转录成cDNA,以cDNA为模板进行qRT-PCR实验,检测线粒体转录相关基因COX1、ND1和ND6以及mtTFA、SIRT1与PGC-1α mRNA水平,以β-actin为内参。引物序列及产物见表 1

表 1 PCR引物序列和产物长度
名称 序列(5′→ 3′) 产物长度/bp
mtTFA 正义:AGAAGAATTGCCCAGCGTTGG
反义:TGCCACTCCGCCCTATAAGC
156
SIRT1 正义:AGAACTTCAGTGGCTGGAACAGTG
反义:CCATCAAGCCGCCTACTAATCTGC
150
PGC-1α 正义:GGATGCGCTCTCGTTCAAGGTC
反义:GTGCGTGCGGTGTCTGTAGTG
110
COX1 正义:TCTGACTCTTACCTCCCTCT
反义:AAGATGGTTAGGTCTACGGA
164
ND1 正义:CTCTCACCATCGCTCTTCTA
反义:CAGAGGATTGAGTAAACGGC
103
ND6 正义:TTCTTCTAAGCCTTCTCCTATTT
反义:CCAAAGACAACCATCATTCC
169
COX1(DNA) 正义:GTTCGCCGACCGTTGACTAT
反义:GGCTCGAATAAGGAGGCTTAG
129
β-actin 正义:AGACCTGTACGCCAACACAG
反义:GTACTTGCGCTCAGGACCAG
132

1.4.4 Western blot检测

提取组织总蛋白,按照蛋白量50 μg/孔进行6%、10% SDS-PAGE凝胶电泳(80 V 30 min,120 V 60 min),转膜(200 mA 2 h),封闭(2 h),一抗(1 :500)4 ℃过夜,TBST充分洗膜,二抗(1 :2 000)室温孵育2 h,TBST充分洗膜,ECL发光显色,读取Western条带灰度值。以β-actin为内参,mtTFA、SIRT1和PGC-1α灰度值与内参灰度值的比值为各自目标蛋白的相对表达量。

1.4.5 胆汁淤积细胞模型的构建与干预

将L02细胞暴露于不同浓度(0、50、100、150 μmol/L)的GCDCA中孵育12 h,分别设为对照组(0 μmol/L GCDCA)、低剂量组(50 μmol/L GCDCA)、中剂量组(100 μmol/L GCDCA)与高剂量组(150 μmol/L GCDCA),Western blot检测各组相关蛋白的表达情况;综合考虑各蛋白表达的影响和剂量安全因素,选用中剂量组作为激动组,经过药物浓度梯度实验,选用浓度为50 μmol/L的SRT1720作为干预因素,分别设为阴性对照组(0 μmol/L GCDCA)、阳性对照组(0 μmol/L GCDCA+ 50 μmol/L SRT1720)、胆汁淤积组(100 μmol/L GCDCA)与激动组(100 μmol/L GCDCA+50 μmol/L SRT1720),Western blot测定干预12 h后mtTFA蛋白的变化情况。

1.5 统计学分析

采用SPSS 22.0统计软件,数据以x±s表示,行Student-t检验或单因素方差分析,检验水准:α=0.05。

2 结果 2.1 临床资料统计情况

严格按照入组条件,共纳入病例35例,其中黄疸组25例,对照组10例。两组性别差异无统计学意义,黄疸组肝功检测在总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转肽酶中较对照组显著升高,差异具有统计学意义(P < 0.000 1,表 2)。

表 2 各组患儿的临床资料比较
组别 男/女 年龄/月 总胆汁酸/μmol·L-1 总胆红素/μmol·L-1 直接胆红素/μmol·L-1 间接胆红素/μmol·L-1 谷丙转氨酶/U·L-1 谷草转氨酶/U·L-1 碱性磷酸酶/U·L-1 谷氨酰转肽酶/U·L-1
对照组 4/6 9.2±1.6 10.4±2.9 6.1±2.6 0.5±0.7 5.2±3.0 56.4±27.0 58.1±32.7 175.1±74.8 54.9±54.3
黄疸组 14/11 2.6±0.7a 133.1±31.9b 201.0±58.6b 153.6±46.8b 36.6±20.1b 227.4±189.6b 358.1±285.0b 619.1±232.5b 320.4±143.6b
a:P < 0.05,b:P < 0.000 1,与对照组比较

2.2 肝组织细胞形态变化

HE染色结果显示,对照组患儿肝组织轮廓清楚,肝细胞呈放射状排列,且染色均匀,结构清晰;而黄疸组肝细胞胞质内胆色素沉积,肝索结构紊乱,部分肝细胞轮廓不清,肝血窦、胆小管扩张,内见胆汁淤积,见图 1

A:对照组;B:黄疸组 图 1 HE染色检测肝组织病理学变化

2.3 mtDNA拷贝数及转录水平的变化

Real-time PCR检测结果显示,黄疸组肝细胞中(0.57±0.22)mtDNA拷贝数较对照组(0.97±0.17)明显下降(P < 0.01);qRT-PCR检测结果显示,黄疸组肝细胞中mtDNA编码基因转录水平较对照组明显降低(P < 0.05,图 2)。

a:P < 0.01,b:P < 0.05,与对照组比较 图 2 qRT-PCR测定肝细胞mtDNA转录水平的变化情况

2.4 mtTFA、SIRT1与PGC-1α在胆汁淤积性黄疸患儿肝细胞中的表达情况

qRT-PCR检测结果显示,黄疸组mtTFA、SIRT1和PGC-1α mRNA表达均较对照组显著降低(P < 0.05);Western blot检测结果显示,mtTFA、SIRT1与PGC-1α蛋白在两组中均有表达,黄疸组mtTFA和SIRT1蛋白表达均较对照组显著下降(P < 0.05), 而PGC-1α蛋白表达无明显变化(P>0.05,图 3)。

1、2:对照组;3、4:黄疸组A:qRT-PCR检测mtTFA、SIRT1和PGC-1α mRNA相对表达量;B:Western blot检测结果;C:半定量分析  a:P < 0.01,b:P < 0.05,c:P < 0.001,与对照组比较 图 3 肝细胞mtTFA、SIRT1和PGC-1α的表达情况

2.5 在GCDCA诱导及SIRT1720干预下mtTFA的表达变化

Western blot检测结果显示,不同浓度的GCDCA暴露使L02细胞的mtTFA与SIRT1蛋白水平受到了不同程度的抑制,随着浓度增加,mtTFA和SIRT1蛋白表达逐渐减少(P < 0.05),而PGC-1α无明显变化(P>0.05,图 4)。SRT1720干预后,mtTFA蛋白在激动组中的表达较胆汁淤积组明显升高(P < 0.05,图 5)。

1:对照组(0 μmol/L GCDCA);2:低剂量组(50 μmol/L GCDCA);3:中剂量组(100 μmol/L GCDCA);4:高剂量组(150 μmol/L GCDCA) A:Western blot检测结果;B:半定量分析  a:P < 0.05,b:P < 0.001,c:P < 0.01,与对照组比较 图 4 GCDCA诱导的L02细胞中mtTFA、SIRT1和PGC-1α蛋白表达情况

1:阴性对照组(0 μmol/L GCDCA);2阳性对照组(0 μmol/L GCDCA+50 μmol/L SRT1720);3:胆汁淤积组(100 μmol/L GCDCA);4:激动组(100 μmol/L GCDCA+50 μmol/L SRT1720)   A:Western blot检测结果;B:半定量分析  a:P < 0.01,与阴性对照组比较;b:P < 0.05,与胆汁淤积组比较 图 5 SRT1720干预的L02细胞中mtTFA蛋白表达情况

3 讨论

婴儿期机体代谢系统发育尚不完善,肝细胞处理胆汁酸、胆红素的能力较差,相较于成人,更容易形成胆汁淤积环境,导致氧化应激发生。在胆汁淤积性黄疸中,时间是一个关键性因素,长期的毒胆酸聚集被认为是引起肝细胞损害的关键因素,其中GCDCA是最主要的毒胆酸[9]。目前仍然没有有效的方法应对毒胆酸对肝功能的损害。本研究通过分析患儿临床病例资料发现,黄疸组患儿的肝功检测指标与对照组相比差异具有统计学意义;HE染色结果提示黄疸组肝细胞胞质内胆色素沉积,肝索结构紊乱,内见胆汁淤积。这些结果表明胆汁淤积性黄疸患儿存在着肝脏形态功能的损害,而目前关于胆汁淤积导致肝损害过程中所涉及的作用机制尚未明确。有研究表明,在胆汁淤积环境中反映氧化应激的指标丙二醛含量显著增加,总谷胱甘肽水平明显减少,伴随着氧化应激水平地增加,肝脏线粒体ATP水平明显减少、膜电位严重破坏以及呼吸链复合体活性显著降低,最终导致线粒体功能障碍[4-5, 10]。这些研究结果提示氧化应激和线粒体功能障碍可能涉及肝脏胆汁淤积的发病机制。

mtDNA在维持线粒体内稳态中起重要作用,然而,由于mtDNA邻近产生ROS的线粒体内膜,且缺乏内含子及损伤修复能力,使得mtDNA对氧化应激异常敏感,极易受到氧化损伤。文献[11]报道,在胆汁淤积患者中,反映DNA氧化损伤的生物学标志8-OHdG含量明显增加。本研究结果显示,胆汁淤积性黄疸患儿中mtDNA拷贝数与转录水平均显著减少。mtDNA拷贝数与线粒体的质量和数量关系密切,线粒体结构的维持对于其正常功能的运转具有重要作用;线粒体编码基因转录水平与线粒体的功能关系密切,线粒体功能的正常发挥对于维持细胞生物学作用具有重要意义。mtDNA拷贝数与转录水平的减少将导致呼吸链关键蛋白合成减少,阻止线粒体的生成和破坏线粒体内环境的稳定。

既往认为,mtDNA是裸露的,但更多证据显示mtDNA存在着一种拟核结构,其中mtTFA在这种结构中起重要作用[12-13]。mtTFA是由核染色体10q 21编码的28×103的蛋白,含有两个HMGbox结构域,属于典型的高迁移蛋白(HMG)家族,具有结合和缠绕mtDNA及解螺旋能力,对维持mtDNA空间构象,调节其复制、转录及损伤修复具有重要作用,其地位类似于与核DNA相结合的组蛋白[6]。TIAO等[3]发现在大鼠胆总管结扎模型中,结扎2周后mtTFA代偿性地增高,而在4周后mtTFA表达显著下降,对应的肝组织mtDNA拷贝数也明显减少。本研究结果表明,无论在胆汁淤积性黄疸患儿肝脏还是GCDCA诱导的胆汁淤积模型中mtTFA表达水平均显著减少,这也与XU等[11]报道结果相符。因此,认为mtDNA的损伤可能是mtTFA表达下降的结果。KANG等[7]认为mtTFA覆盖能保护mtDNA免遭GCDCA诱导的肝细胞氧化修饰或其他损伤。其次,过表达mtTFA能刺激mtDNA的复制和转录,有利于逆转GCDCA诱导的肝细胞mtDNA拷贝数减少和转录水平下降。然而慢性胆汁淤积制造的氧化应激持续破坏mtTFA,使mtDNA长时间暴露在氧化应激环境中,从而可造成mtDNA的不可逆损伤。

SIRT1是一种与细胞增殖、分化、衰老、凋亡和代谢密切相关的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的蛋白去乙酰化酶,在氧化应激中起重要作用[8, 14]。PGC-1α可通过SIRT1去乙酰化作用提高其活性,诱导细胞抗氧化酶的表达,其作为辅激活因子通过激活与线粒体生物合成相关的关键基因,对mtDNA的复制、转录及翻译发挥重要的调控作用[15]。文献[16]报道,在糖尿病小鼠肾组织中SIRT1表达降低,并伴随着氧化应激反应增强,细胞凋亡率增加。还有研究表明,在肝缺血/再灌注损伤中,SIRT1的表达和活性均可发生改变[17]。这与本研究发现在胆汁淤积患儿肝脏及GCDCA诱导的L02细胞中SIRT1表达明显受到抑制的实验结果类似,认为SIRT1在各种因素导致的氧化应激环境中均扮演着重要的角色,并可能参与多条通路的调节。ERION等[18]研究显示,特异性敲除SIRT1后严重影响大鼠肝脏的生理代谢。在同类型动物实验中,敲除肝细胞SIRT1能导致明显的肝脂肪性病变,可显著加剧肝脏的炎症反应并可加重内质网应激反应。ZHOU等[19]报道,激动SIRT1后可增加PGC-1α的活性进而抑制由大鼠脑出血继发性损伤所诱导的神经细胞凋亡。在肾脏缺血再灌注损伤研究中发现,给予SIRT1激动剂后可活化SIRT1信号通路,从而改善了肾小管上皮细胞内线粒体的功能状态,进而使得肾小管功能得到有效的恢复[20]。本研究发现,予以SRT1720激动剂后mtTFA蛋白的表达较GCDCA诱导的胆汁淤积组明显升高。因此,认为mtTFA的表达可能与SIRT1信号通路的调节有关。

本研究中PGC-1α的蛋白水平始终无明显变化,这也与TAN等[21]报道结果相一致,认为胆汁淤积环境中,细胞内总PGC-1α蛋白的含量虽然没有发生明显变化,但却受SIRT1活性的调节,下调的SIRT1对PGC-1α的去乙酰化作用减弱,PGC-1α的乙酰化水平升高,导致PGC-1α活性降低,从而对细胞线粒体的生成水平和线粒体的功能状态产生负影响。此外,PGC-1α蛋白的去乙酰化水平不仅仅依赖于SIRT1蛋白的激活,还存在其他不同因素的调节,有研究表明,在白藜芦醇激活AMPK后,可以通过磷酸化作用激活PGC-1α从而改善线粒体功能[20]。同时,SIRT1也可以通过和FOXO结合并去乙酰化FOXO从而发挥其抗氧化作用[22]。但目前也存在着与前述研究结果不符的发现,在大鼠心肌、骨骼肌以及肌源性细胞实验中,过表达或激动SIRT1后可上调SIRT1的表达与活性,但是却下调PGC-1α、mtTFA、COXⅣ等的表达,未能改善线粒体的功能[23-24]。因此,后期仍需继续扩大临床样本量,构建胆汁淤积动物模型,过表达、干扰相关通路靶点以进一步阐述其调控机制。

综上所述,本研究结果提示在胆汁淤积性黄疸患儿中存在着mtDNA的损伤,这种损伤归因于mtTFA的缺失,且mtTFA的变化可能受SIRT1通路的调控。因此,激活SIRT1/PGC-1α/mtTFA轴以调控mtTFA的表达来维持mtDNA的稳定可能成为婴儿胆汁淤积性黄疸治疗的新策略。

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http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201811084
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

文章信息

刘威, 宁禹, 陈思, 周婉怡, 刘焱, 包斌霞, 张明满.
LIU Wei, NING Yu, CHEN Si, ZHOU Wanyi, LIU Yan, BAO Binxia, ZHANG Mingman.
线粒体转录因子A在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达及其意义
Expression and significance of mitochondrial transcription factor A in hepatocytes of infants with cholestatic jaundice
第三军医大学学报, 2019, 41(9): 859-865
Journal of Third Military Medical University, 2019, 41(9): 859-865
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201811084

文章历史

收稿: 2018-11-12
修回: 2019-02-01

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