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双特异性磷酸酶3和TNF-α对雷公藤多苷片治疗类风湿关节炎的预后作用及其受调节机制
李兴锐, 谭悦, 刘童, 葛显应, 陆继娣, 孟林, 荣华东     
237006 安徽 六安,六安市人民医院风湿免疫科
[摘要] 目的 探讨双特异性磷酸酶3(dual specificity protein phosphatase 3,DUSP3)和TNF-α作为雷公藤多苷(tripterygium glycosides,TG)片治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)预后生物标记物的可行性和调节机制。方法 选取本院于2016年3月至2018年1月收治的67例RA患者及67例健康志愿者,RT-PCR检测治疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中DUSP3和TNF-α表达,并进行ROC分析。以TG处理脂多糖刺激的U937细胞,模拟TG片治疗RA,通过RT-PCR、Western blot和免疫共沉淀实验检测DUSP3和TNF-α之间的关系,及其上下游通路。结果 与健康志愿者相比,RA患者(用药前)PBMC中DUSP3表达降低而TNF-α表达升高(P < 0.05)。TNF-α和DUSP3进行ROC分析的AUC分别为0.948和0.908。治疗后RA患者DAS28,ESR和CRP值下降,DUSP3和TNF-α表达分别升高和降低(P < 0.05)。TG片用药响应和不响应(骨侵蚀指标)的RA患者的DUSP3和TNF-α表达水平差异显著(P < 0.05)。以用药后DAS28表达变化区分RA患者是否响应TG片治疗,ROC分析显示DUSP3和TNF-α的AUC分别为0.821和0.747。在LPS刺激的U937细胞中,改变DUSP3或TNF-α表达不相互影响表达。Western blot结果显示NF-κB介导TG对TNF-α调节。ChIP结果证实TG抑制了HDAC1与DUSP3启动子区相互作用。Western blot结果表明TG给药抑〖JP+1〗制了LPS诱导的HDAC1上调和DUSP3下调。结论 TG片对RA有较好的治疗效果。其中,DUSP3和TNF-α可以作为TG片治疗RA的预后因子。TG给药降低了TNF-α的表达,并解除了对DUSP3的抑制。
[关键词] 雷公藤多苷     类风湿关节炎     预后因子     DUSP3     TNF-α    
Dual specificity protein phosphatase 3 and tumor necrosis factor-α as prognostic biomarkers and their regulation by tripterygium glycosides in rheumatoid arthritis
LI Xingrui, TAN Yue, LIU Tong, GE Xianying, LU Jidi, MENG Lin, RONG Huadong     
Department of Rheumatology and Immunology, Liu'an People's Hospital, Liu'an, Anhui Province, 237006, China
Corresponding author: LI Xingrui, E-mail:13956113863@163.com
[Abstract] Objective To investigate the prognostic value of dual specificity protein phosphatase 3(DUSP3) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) and how tripterygium glycosides(TG) regulate DUSP3 and TNF-α expression in patients with rheumatoid arthritis(RA). Methods A total of 67 patients with RA receiving treatment with TG tablets in our hospital between March, 2016 and January, 2018 and 67 healthy volunteers were enrolled in this study. The expression of DUSP3 and TNF-α in the peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) of the participants was detected using real-time PCR(RT-PCR), and the results were analyzed using the receiver operating curve(ROC). In U937 cells stimulated with lipopolysaccharide(LPS), the effects of TG on the expressions of DUSP3, TNF-α and their upstream and downstream pathways were investigated using RT-PCR, Western blotting and chromatin immunoprecipitation(ChIP). Results Compared with the healthy volunteers, the RA patients showed significantly reduced DUSP3 expression and increased TNF-α expression in the PBMCs(P < 0.05), whose areas under the curve(AUC) were 0.948 and 0.908, respectively. Treatment with TG tablets resulted in significantly decreased 28-joint Disease Activity score(DAS28), erythrocyte sedimentation rate(ESR) and C-reactive protein(CRP), increased expression of DUSP3 and decreased TNF-α expression in the RA patients(P < 0.05). Significant differences were found in the expression of DUSP3 and TNF-α between the RA patients who responded to the treatment and the non-responding patients(with bone erosion, P < 0.05). ROC analysis showed that the AUC of DUSP3 and TNF-α was 0.821 and 0.747, respectively, for predicting the patients' response to TG treatment(defined by the changes in DAS28). In LPS-stimulated U937 cells, the changes in DUSP3 or TNF-α expression did not affect the expression of one another. The rescue experiments demonstrated that nuclear factor-κB(NF-κB) mediated the inhibitory effect of TG on TNF-α expression. ChIP experiments confirmed that TG suppressed the conjugation of HDAC1 with DUSP3 promoter; Western blotting showed that TG inhibited LPS-induced up-regulation of HDAC1 and down-regulation of DUSP3. Conclusion TG tablet produces good therapeutic effect on RA by reducing the expression of TNF-α and relieving the inhibition on DUSP3. DUSP3 and TNF-α can serve as prognostic biomarkers for RA patients receiving treatment with TG tablets.
[Key words] tripterygium glycosides     rheumatoid arthritis     prognostic factors     dual specificity protein phosphatase 3     tumor necrosis factor-α    

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性系统性自身免疫疾病,病理特征包括慢性滑膜炎、细胞浸润、形成滑膜翳、骨和软骨侵蚀以及关节结构破坏[1]。RA风险因子包括易感基因突变、表观遗传修饰、吸烟、微生物感染、女性性别、西方饮食和种族[2]。传统抗风湿药只能减轻症状延缓病程,且容易引起严重的副作用,而生物抗风湿药花费昂贵[3]

雷公藤多苷(tripterygium glycoside,TG)片通过免疫抑制和抗增殖作用抑制RA的进展:影响CD4+ T细胞,调节T细胞生成和树突细胞生成与活化;降低肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、核因子κB(NF-κB)等炎症介导因子;降低血管生成因子;调节NF-κB受体活化子配体(RANKL)-RANK-护骨素信号通路,抑制c-Jun激酶活化,调节免疫相关的骨质平衡;抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/JNK途径激酶磷酸化,防止滑膜成纤维细胞侵袭。但TG片也会诱导肝损伤、肾损伤和生殖毒性[4-5]

发展预后标记,有助于合理用药。RA患者分泌大量TNF-α驱动RA发生发展[6-7]。LPS通过刺激NF-κB瓜氨酸化修饰和入核,促进TNF-α表达[5, 8]。雷公藤甲素通过抑制NF-κB磷酸化抑制TNF-α表达,促进成骨细胞分化[9]

MAPKs促进了RA炎性环境生成、骨损伤、滑膜组织重塑、滑膜内膜基质降解[10]。而雷公藤提取物显著抑制了MAPK信号激酶磷酸化[11]。双特异性磷酸酶(dual specificity protein phosphatase,DUSP)家族蛋白通过去磷酸化活化的MAPK家族蛋白抑制其活性[12]

本研究表明,RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中DUSP3和TNF-α表达显著改变,但被TG片治疗缓解。DUSP3和TNF-α可作为TG片治疗RA独立的预后标记。TG通过抑制NF-κB磷酸化下调了TNF-α表达,并通过抑制HDAC1促进DUSP3的生成。本研究有助于促进TG片在RA治疗中的应用。

1 资料与方法 1.1 一般资料

选取2016年3月至2018年1月就诊于六安市人民医院风湿门诊的RA患者67例。患者的诊断均符合美国风湿病学院对于类风湿关节炎的诊断标准(2010年)。排除标准:①急性、慢性感染,结核感染,肿瘤及其他慢性疾病,自身免疫疾病患者;②3个月内接受生物试剂和传统抗RA药物治疗的患者;③孕妇和哺乳期妇女。本研究2016年5月经本院伦理委员会审批。RA患者包括男性18例,女性49例,年龄33~74(54.3±13.2)岁,给予TG片治疗,按体质量给药每日l~1.5 mg/kg,分3次饭后服用;选取在本院参加体检的年龄性别相匹配(P>0.05)的67名健康志愿者作为对照,包括22名男性,45名女性,年龄28~75(56.1±10.8)岁。分别抽取清晨空腹状态下健康志愿者外周血以及治疗前和治疗1个月的RA患者静脉血5 mL, 放入EDTA抗凝管中, 送化验科进行相关指标检测。TG片治疗前RA患者与健康志愿者的特征见表 1

表 1 TG片治疗前RA患者与健康志愿者的特征
组别 n 年龄(x±s) 女性/ n(%) 病程(月) ESR/mm·h-1 CRP/mg·L-1 DAS28(x±s)
治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后
RA患者 67 54.3±13.2 49(73) 102(60~150) 39.5(31.3~48.1)a 26.8(22.4~34.6)b 23.1(18.2~35.4)a 18.7(14.5~27.8)b 5.9±2.1 3.6±1.2b
健康志愿者 67 56.1±10.8 45(67) - 11.3(8.5~14.2) - 5.8(3.9~6.7) - - -
a:P < 0.05,与健康志愿者比较;b:P < 0.05,与治疗前比较;CRP:C反应蛋白;DAS28:28处关节疾病活动度评分;ESR:红细胞沉降率

1.2 疾病评估

由住院病历获得临床数据,包括关节肿胀数(swollen joint count,SJC)和压痛关节数(tender joint count,TJC)。通过标准方法检测血液指标,包括红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)。拍摄双手X线片计算28处关节疾病活动度评分(disease activity score using 28 joint counts,DAS28)评分获取RA患者疾病活动度,公式: DAS28=0.56×sqrt(TJC)+0.28×sqrt(SJC)+0.70× ln(ESR/CRP)×1.08+0.16,计算肩、肘、膝、腕、掌、指关节1~5,近端指间关节1~5,共28个关节;sqrt:开平方;ln:取自然对数[13]。采用改良的sharp评分法,计算关节破坏的侵蚀积分和狭窄积分。由两位放射科专业医师单独、盲法阅片,评分值取平均数。

1.3 药物与试剂

药物:雷公藤多苷片(10 mg/片,国药准字:Z33020422;浙江得恩德制药有限公司),用于RA患者;雷公藤多苷(TG,浙江新昌第二制药厂),用于细胞实验。试剂:胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基、0.25%胰酶(GIBCO),IgG Beads(Sigma),HDAC1抗体、pNF-κB抗体、TNF-α抗体、DUSP3抗体、ERK1/2抗体、JNK抗体(cell sinaling, Abcam),lip2000(invitrogen)。

1.4 PBMC及总RNA分离

采用标准Ficoll密度梯度离心法分离外周血PBMC,用洗液(含2%FBS的PBS)洗涤2次。用TRIzol试剂提取PBMC的总RNA,并反转录为互补DNA。

1.5 细胞培养和药物处理

人源组织细胞淋巴瘤细胞U937在含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基中培养,放置于37 ℃ 5%CO2的培养箱中培养。新鲜消化清洗的细胞以100 ng/mL的脂多糖(LPS)预处理2 h,然后加入不同浓度(1、10、30 μg/mL)的TG培养48 h。

1.6 稳定转染

制备了HDAC1稳转细胞株。培养HEK293T细胞,转染包装质粒及含有靶序列的质粒,第2天更换培养基,并将靶细胞铺板,48 h后用HEK293T细胞培养基(过滤后)培养靶细胞48 h,更换培养基,筛选靶细胞。

1.7 RT-PCR与Western blot检测

用SYBR Green RT-PCR试剂检测PBMC中DUSP3和TNF-α表达。Western blot检测过程如下,于冰上裂解细胞,收集蛋白并测定浓度,加入上样缓冲液并煮沸,冷却后上样到SDS-PAGE胶进行电泳,电泳后依次进行PVDF半干转膜,封闭液封闭,一抗孵育,洗涤,二抗孵育,洗涤及显影。

1.8 染色质免疫共沉淀

细胞经多聚甲醛固定后裂解超声,用抗HDAC1抗体免疫沉淀与HDAC1结合的染色质复合物,然后用耦连G蛋白的免疫磁珠回收。超声断裂DNA。将蛋白与DNA热解离后,纯化DNA,并通过PCR和RT-PCR检测。

1.9 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行分析,数据采用x±s和中位数(第一四分位数~第三四分位数)表示。采用K-S检验判断连续变量是否正态分布。Wilcoxon符号秩检验比较响应组与不响应组患者(28例骨侵蚀RA患者)间蛋白表达的数据差异。RA患者DUSP3和TNF-α表达与DAS28评分、sharp评分、CRP、RF相关性采用Pearson’s相关分析。利用受试者工作曲线(ROC)下的面积(AUC)评估DUSP3和TNF-α作为TG片用药临床响应评估的能力。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 RA患者PBMC中TNF-α表达升高而DUSP3表达水平降低

RT-PCR检测结果显示:与健康志愿者相比,RA患者TNF-α表达水平显著升高而DUSP3表达水平显著降低(图 1AB)。为检测DUSP3和TNF-α能否用作RA诊断的生物标记,我们进行了ROC分析(图 1CD),得到DUSP3的AUC为0.908(95%CI: 0.854~0.963),TNF-α的AUC为0.948(95%CI: 0.915~0.981),说明DUSP3和TNF-α是很好的RA诊断指标。此外,DUSP3表达与DAS28(r=-0.472, P=0.007)和CRP(r=-0.371, P=0.016)相关,TNF-α表达与DAS28(r=0.524, P=0.002)和CRP(r=0.404, P=0.008)相关。

A:RA患者与健康志愿者PBMC中DUSP3表达;B:RA患者与健康志愿者PBMC中TNF-α表达;a: P < 0.001,与健康对照比较;C:DUSP3用于RA诊断的ROC曲线;D:TNF-α用于RA诊断的ROC曲线 图 1 RA患者PBMC中DUSP3和TNF-α的表达及其用于RA诊断的ROC曲线

2.2 TG片治疗后TNF-α表达降低,DUSP3表达水平升高

RA患者服用TG片后病情明显缓解,DAS28评分、CRP、ESR的值均显著降低(P < 0.05)。RT-PCR结果显示,与治疗前相比,RA患者接受1个月的TG片治疗后,DUSP3表达水平显著升高而TNF-α表达显著降低(图 2AB)。

A:TG片治疗前后RA患者DUSP3表达;B:TG片治疗前后RA患者TNF-α表达;a: P < 0.001,与基线比较;C:响应与不响应TG片治疗的骨侵蚀RA患者DUSP3和TNF-α的表达差异;a: P < 0.01,与不响应者比较;D:DUSP3用于RA患者TG片治疗预后的ROC曲线;E:TNF-α用于RA患者TG片治疗预后的ROC曲线 图 2 TG片用药后RA患者DUSP3和TNF-α的表达改变及其用于RATG片治疗预后的ROC曲线

女性和男性用药后DUSP3和TNF-α的表达水平相当,差异无统计学意义(P>0.05)。因此。性别因素不影响用药后DUSP3和TNF-α的表达。以平均年龄为界,将患者分为高龄和低龄组,两组患者用药后DUSP3和TNF-α的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),年龄因素也不影响用药后DUSP3和TNF-α的表达。见表 2

表 2 TG片治疗后性别与年龄对DUSP3和TNF-α表达的影响(x±s)
项目 n DUSP3 TNF-α
性别
  女性 49 0.841±0.035 1.344±0.064
  男性 18 0.836±0.055 1.351±0.089
年龄
  高龄 33 0.848±0.042 1.355±0.074
  低龄 34 0.831±0.041 1.337±0.074

在67例RA患者的X线片中,28例患者表现有骨侵蚀征象,根据治疗后骨侵蚀缓解状态,将这28例患者分为TG片治疗响应组(n=18)和非响应组(n=10)。响应组DUSP3的表达显著低于非响应组(0.225 vs 0.579,P < 0.01),而响应组TNF-α的表达高于非响应组(2.487 vs 1.683,P < 0.01,图 2C)。

根据TG片治疗后DAS28的减少程度,将RA患者分为TG片治疗响应组(n=38)和不响应组(n=38),分析响应组和不响应组治疗前DUSP3和TNF-α表达水平,检测将DUSP3和TNF-α作为TG片用药预后响应生物标记的能力。绘制ROC曲线对DUSP3和TNF-α表达水平与临床TG片用药响应的关系分析发现(图 2DE):以DUSP3水平作图(95% CI: 0.753~0.945)的AUC为0.849。以TNF-α水平作图(95% CI: 0.622~0.871)的AUC为0.747。表明治疗前DUSP3和TNF-α表达水平能够很好地预示TG片治疗效果。

2.3 DUSP3和TNF-α表达的调节

为检测TG片调节DUSP3和TNF-α的机制,采用受LPS刺激的U937人组织细胞性淋巴瘤细胞株模拟RA患者体内的PBMC。首先检测了DUSP3和TNF-α之间是否存在调控关系,LPS刺激U937细胞导致DUSP3表达下调而TNF-α表达上调(P < 0.05),而过表达DUSP3或敲低TNF-α并不能影响对方的表达(图 3A),说明DUSP3和TNF-α之间不存在显著的调节关系。

A:DUSP3和TNF-α相对表达a:P < 0.001,与CTRL比较;b:P < 0.001,与LPS+TNF-α siRNA比较;B:Western blot结果示TG通过NF-κB影响TNF-α的表达1:CTRL,2:LPS,3:LPS+TG,4:LPS+TG+NF-κB;C:Western blot检测DUSP3对ERK1/2和JNK磷酸化的影响1:LPS,2:LPS+TG,3:LPS+TG+DUSP3 shRNA;D:PCR和qPCR分析HDAC1与DUSP3 DNA的相互作用1:Input, 2: anti-HDAC1, 3:IgG;E:qPCR分析TG对HDAC1与DUSP3启动子区结合的影响1: anti-HDAC1, 2: anti-HDAC1, 3: anti-IgG;a:P < 0.001,与anti-HDAC1比较;F:Western blot结果示TG通过抑制HDAC1促进DUSP3表达1: CTRL, 2: LPS, 3: LPS+TG, 4: LPS+TG+HDAC1 图 3 DUSP3和TNF-α之间的关系及其上下游信号通路

TG给药抑制了LPS诱导的TNF-α表达和NF-κB磷酸化,而NF-κB过表达促进NF-κB磷酸化,防止了TG对TNF-α的表达抑制(P < 0.05,图 3B)。表明TG对TNF-α的抑制是通过NF-κB介导的。

RT-PCR结果证实TG片给药促进了DUSP3表达并抑制了ERK1/2和JNK磷酸化,而敲低DUSP3表达抑制了这一现象(P < 0.05,图 3C),说明TG通过上调DUSP3促进ERK1/2和JNK去磷酸化。检索Genecards和UCSC数据库发现DUSP3启动子区(转录起始位点下游300 bp)有Sp1结合位点,且有较强的H3K27ac修饰,而RA患病组织中HDAC1是过表达的。我们推测RA组织中,高表达的HDAC1抑制了DUSP3转录,而TG通过抑制HDAC1与DUSP3的相互调节,解除其对DUSP3的抑制。ChIP实验证明,HDAC1与DUSP3启动子区相结合(图 3D),而TG给药使HDAC1与DUSP3的结合减弱(P < 0.05,图 3E)。免疫印迹证明TG给药抑制了LPS诱导的HDAC1表达上调,而HDAC1介导了TG对DUSP3的调节(P < 0.05,图 3F)。

3 讨论

RA是一种多发的非特异性自身免疫性疾病,伴有生成抗免疫球蛋白、类风湿因子,瓜氨酸化蛋白的自身抗体[2]。TG片能够调节免疫相关细胞的生成,抑制炎症介导因子表达,抑制免疫相关的血管生成,调节免疫相关的骨质平衡,以及抑制滑膜成纤维细胞增殖。但TG片治疗效果因人而异,且有一定生理毒性,不能长期使用[14]。因此,需要开发灵敏稳定的预后标记。研究显示雷公藤甲素通过调节NF-κB磷酸化调节TNF-α表达,并显著抑制MAPK途径激酶磷酸化。本研究证实DUSP3和TNF-α的表达与RA的疾病活性相关,且能够预测TG片治疗RA的临床响应。此外,TNF-α和DUSP3没有明显的相互调节作用。离体实验结果表明,TG通过抑制NF-κB磷酸化下调TNF-α表达,并可以抑制HDAC1与DUSP3启动子结合,以及HDAC1表达,以此促进DUSP3的生成及其下游的ERK1/2与JNK去磷酸化。

TNF-α信号途径与RA发病紧密相关。RA发病过程中,过度分泌的TNF-α刺激白细胞浸润,活化内皮细胞生成血管,并诱导滑膜纤维细胞增生[8];免疫细胞产生的TNF-α通过调节FOXP3磷酸化介导调节性T细胞的免疫抑制功能;激活RANKL-RANK-OPG信号通路刺激破骨细胞成熟和骨吸收等[15]。另一方面,MAPKs活化失调导致了RA发病。RA组织中,MAPKs家族蛋白MAPK高表达促进促炎因子的生成,诱导血管内皮细胞增殖,募集炎性细胞[16];ERK1/2可调节细胞的增殖与分化,介导巨噬细胞中促炎因子产生,调节关节处缺氧微环境转变和前列腺素含量[17];JNK促进了基质金属蛋白酶的产生和IL-6与IL-8的合成[17]。而DUSPs家族蛋白是MAPKs的阴性调节因子,对DUSPs的研究可促进RA治疗方法的提高。在我们的研究中,RA患者PBMC中TNF-α表达显著升高,DUSP3显著降低,ROC曲线表明TNF-α和DUSP3水平是RA诊断非常灵敏的生物标记。通过对临床指标的检测表明TG片对于RA患者有较好的治疗效果。TG片治疗后,TNF-α表达显著降低,而DUSP3显著升高,且这一改变不受RA患者年龄与性别的影响。以sharp评分和DAS28评分改善程度作为标准显示,DUSP3和TNF-α表达是TG片治疗的优秀的预后指标。

实验显示DUSP3和TNF-α间没有显著的调节关系,二者可作为独立的生物标记。可能说明TG用药后PBMC中TNF-α和DUSP3的表达变化没有明显的因果关系,而二者也没有共同的、作用显著的上游。因此,NF-κB并不能显著地调节DUSP3表达。调节DUSPs家族蛋白表达的机制有三种:外界刺激造成的转录调节,磷酸化状态调节,催化结构域活化[17]。本研究证明TG给药抑制了HDAC1的表达及其与DUSP3启动子的结合,从而促进DUSP3转录。可能TG给药既抑制了Sp1的活性,也抑制了HDAC1的表达。HDAC家族蛋白通过参与基因表观调节影响RA发病,而HDAC蛋白抑制剂对RA有较好的治疗效果[18-19]。据报道在多种HDAC家族蛋白中,RA患者体内的HDAC1是显著过表达的[19-20]。HDAC3调节RA患者PBMC中IL-6的分泌和滑膜成纤维细胞中炎症基因的表达[21]。此外,HDAC抑制剂促进了RA滑膜成纤维细胞E11中DUSP1表达,从而抑制了MAPK活性,这与本文TG调节DUSP3以及ERK1/2和JNK的机制类似[22]。但在PBMC中,致病因子和TG如何调节HDAC1与DUSP3启动子的相互调节,及如何调节HDAC1表达并不清楚,需要进一步的实验研究。

本研究发现的TG给药导致NF-κB磷酸化抑制和TNF-α表达下调与先前的研究是一致的,且ROC分析结果表明TNF-α的表达与TG给药的预后显著相关,说明NF-κB是TG的一个比较直接的调节靶点。DUSP3作用底物包括ERK1/2、JNK、p38(较弱)以及STAT5、EGFR、ErbB2等[23]。在多种体系中的研究表明DUSP3参与的细胞过程:调节正常细胞的周期进程,如通过ERK1/2调节纺锤体双极化结构[24];影响炎症作用,如防止肺癌组织中单核和巨噬细胞浸润[25],调节腹膜巨噬细胞中LPS刺激导致的雌激素介导的ERK1/2与AKT活化[26],参与血小板活化和血栓形成;调节血管生成以及在肿瘤细胞中抑制凋亡,降低粘附[27]等。但DUSP3在RA发病中的作用尚未有研究。此外,本研究发现TG给药促进DUSP3表达,从而抑制了ERK1/2和JNK磷酸化,这与DUSP1和DUSP2的作用是不同的,可能也与他们分处不同的组织有关[28]。RA组织中,MAPK在滑膜微脉管系统和滑膜衬里层细胞高表达,ERK1/2在炎症性滑膜组织的微脉管周围细胞,而JNK是在单核浸润细胞中显著表达[10]。RA患者PBMC中DUSP3表达下调可能会促进PBMC的分化、浸润和炎症作用以及促进滑膜组织基质降解和血管生成,这需要进一步的实验检测。

综上所述,DUSP3和TNF-α是TG片治疗RA的灵敏的预后标记。TG片通过抑制HDAC与DUSP3的相互调节及HDAC1的表达促进了DUSP3的转录,抑制了MAPK信号途径,并通过抑制NF-κB磷酸化抑制TNF-α表达。然而对于DUSP3和TNF-α作为预后指标如何指导用药,还需进一步研究。

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http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201806039
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

文章信息

李兴锐, 谭悦, 刘童, 葛显应, 陆继娣, 孟林, 荣华东.
LI Xingrui, TAN Yue, LIU Tong, GE Xianying, LU Jidi, MENG Lin, RONG Huadong.
双特异性磷酸酶3和TNF-α对雷公藤多苷片治疗类风湿关节炎的预后作用及其受调节机制
Dual specificity protein phosphatase 3 and tumor necrosis factor-α as prognostic biomarkers and their regulation by tripterygium glycosides in rheumatoid arthritis
第三军医大学学报, 2019, 41(1): 77-84
Journal of Third Military Medical University, 2019, 41(1): 77-84
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201806039

文章历史

收稿: 2018-06-07
修回: 2018-08-30

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