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抗间皮素嵌合抗原受体修饰T细胞治疗卵巢癌的实验研究
杨永君1, 李瑶2, 尹立1, 刘新东1, 卞修武1, 余时沧1     
1. 400038 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院:全军临床病理学研究所;
2. 400038 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院:乳腺外科
[摘要] 目的 观察抗间皮素(mesothelin,MSLN)嵌合抗原受体修饰的T细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用,探索新的卵巢癌治疗手段与策略。方法 设计人源化抗人间皮素的嵌合抗原受体融合基因;构建慢病毒表达载体;感染人外周血单核细胞,制备稳定表达抗MSLN嵌合抗原受体的T细胞(chimeric antigen receptor-modified T cells, CART);Western blot、qRT-PCR、流式细胞术检测CAR的表达;免疫组织化学法和Western blot检测卵巢癌样本及细胞系中MSLN表达;体内和体外实验验证CART细胞对卵巢癌细胞的杀伤能力。结果 与正常组织相比,卵巢癌组织MSLN表达显著升高(P < 0.01);成功制备了抗MSLN-CART细胞;体外实验证明,抗MSLN-CART细胞能够特异性识别和杀伤MSLN阳性的卵巢癌细胞,效靶比为2-4:1时,MSLN-CART杀伤率仍达到80%;NOD/SCID小鼠卵巢癌原位移植瘤模型证明,经尾静脉回输抗MSLN-CART细胞(1×107/只,共2次),原位移植瘤消失。结论 抗MSLN-CART细胞能有效、特异且安全地杀伤卵巢癌细胞,抑制肿瘤的生长。
[关键词] 卵巢肿瘤     间皮素     嵌合抗原受体修饰T细胞     杀伤作用    
Anti-mesothelin chimeric antigen receptor modified T cells for ovarian cancer
YANG Yongjun1 , LI Yao2 , YIN Li1 , LIU Xindong1 , BIAN Xiuwu1 , YU Shicang1     
1. Institute of Pathology, First Affiliated Hospital, Army Military Medical University (Third Military Medical University), Chongqing, 400038, China;
2. Department of Breast Surgery, First Affiliated Hospital, Army Military Medical University (Third Military Medical University), Chongqing, 400038, China
Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China (81572880) and the Clinical Major New Technology Project of First Affiliated Hospital of Third Military Medical University (SWH2016ZDCX1005)
Corresponding author: YU Shicang, E-mail:yushicang@163.com
[Abstract] Objective To observe the killing effect of anti-mesothelin (MSLN) chimeric antigen receptor (CAR) modified T cells (CART) for ovarian cancer cells, and explore new treatment methods and strategies for the tumor. Methods A humanized CAR structure of anti-human MSLN was designed and ligated to a lentiviral vector. Human peripheral blood mononuclear cells were infected with associate lentivirus for introduction of CART. Western blotting, qRT-PCR and flow cytometry were used to detect the correct expression of CAR structure on the membrane surface of CART. The expression of MSLN in ovarian cancer samples and cell lines was detected by immunohistochemical assay and Western blotting. The cytotoxicity of the CART cells to kill MSLN-positive ovarian cancer cells was evaluated via in vitro and in vivo experiments. Results Compared with normal tissues, ovarian cancer tissues highly expressed MSLN (P < 0.01); The anti-MSLN-CART cells were successfully prepared, and these cells specifically recognized and killed MSLN-positive ovarian cancer cells in vitro experiments. When the E:T ratio was 2-4:1, the killing rate still remained at 80%. Moreover, the orthotopic xenografts of ovarian cancers in NOD/SCID mice disappeared completely after totally 1×107 MSLN-CART cells were injected via the tail vein twice. Conclusion Anti-MSLN-CART cells can effectively, specifically and safely kill ovarian cancer cells, inhibit the growth of tumors.
[Key words] ovarian cancer     mesothelin     chimeric antigen receptor modified T cells     killing effect    

目前,卵巢癌的发病率和病死率均较高[1-2]。针对卵巢癌的标准治疗方案以外科手术治疗为主,辅以顺铂和紫杉烷联合化疗[3],中位生存期仅为18个月[4]。因此,需要寻找更有效的卵巢癌治疗手段。

嵌合抗原受体修饰T细胞(chimeric antigen receptor- modified T cells,CART)疗法是过继免疫治疗的典型代表。该方法利用基因转导技术在T细胞表面稳定表达可特异性识别肿瘤相关抗原(tumor-associate antigen,TAA)的单链可变区片段(single-chain variable fragment,ScFv),并与CD3ζ链和其他共刺激分子如CD28/CD137相连[5-7],从而特异性地激活T细胞,即利用抗原抗体特异性与高亲和性的特点,非MHC限制性识别肿瘤细胞并活化T细胞,进而产生免疫杀伤效应[8],具有靶向性强、杀瘤范围广和效果持久的特点。近年来,靶向CD19抗原的CART疗法,在治疗复发性、耐药性的B淋巴细胞肿瘤(急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤)中展现出了超乎预期的效果,缓解率90%[9-11],完全缓解生存时间则长达2年[12]。然而,CART在卵巢癌等实体瘤治疗中效果尚不明确。

间皮素(mesothelin, MSLN)是一种40×103大小的糖基化膜蛋白,由间皮素编码基因合成的71×103前体蛋白加工处理而成[13],仅在有限的正常组织,如胸膜、心包膜、腹膜的单层间皮细胞和卵巢、输卵管、扁桃体上皮细胞少量表达[14],却均匀而弥散地高表达于卵巢癌(70%)等一些肿瘤细胞表面[15-17]。尽管MSLN在卵巢癌发生、发展中的作用尚待深入研究,但是其在正常组织中限制性低表达,而在卵巢癌组织中显著性高表达的特点,使其具备成为TAA的潜力。已有研究证实MSLN作为免疫治疗靶点的安全性和有效性,包括靶向MSLN抗毒素、抗MSLN抗体、MSLN疫苗和抗体偶联药物等[18-19],特别是采用鼠源性ScFv构建的CART细胞,在体外和免疫缺陷小鼠体内实验中,都展现出非MHC限制性抗肿瘤效应[20]

本研究以MSLN作为TAA,采用人源化抗人MSLN ScFv,与T细胞活化分子CD3ζ链及共刺激分子CD28构建CAR融合基因,在保证CART细胞特异性识别肿瘤抗原、增强T细胞活化和续存能力、避免脱靶效应的同时,减少了宿主抗异基因体液免疫应答。通过体外和免疫缺陷小鼠原位移植瘤体内杀伤实验,探讨该CART细胞对卵巢癌细胞的杀伤能力,为进一步开展临床实验提供依据。

1 材料与方法 1.1 细胞系

HEK293T细胞系购自ATCC,人卵巢癌细胞系A2780、H08910来自本实验室细胞冻存库,以含10% FBS的DMEM培养基培养。卵巢癌细胞系SNU-119购自中国科学院细胞库,白血病细胞系Jurkat由全军临床病理学研究所刘新东教授惠赠,人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)来自健康供者,以含10% FBS RPMI1640培养基(10 ℃热灭活FBS,50 U/mL青霉素、50 μg硫酸链霉素,10 mmol/L HEPES,2 mmol/L L-谷氨酰胺,1 mmol/L丙酮酸盐,55 μmol/L β-巯基乙醇)培养。以上细胞支原体检测阴性。

1.2 靶向MSLN-CAR的构建

人源化抗人MSLN ScFv DNA片段由全军临床病理学研究所刘新东教授惠赠,采用分子克隆技术将该ScFv、CD3ζ链和CD28共刺激分子组成的融合链克隆到带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)标签的慢病毒载体PWPXLD(Addgene)中,命名为MSLN-CAR。

1.3 重组慢病毒生产

转染前1 d,将5×106生长状态良好的第3~6代HEK293T细胞传入T-75培养瓶内。所有用于包装慢病毒的质粒都经过去内毒素大抽试剂盒(Invitrogen)标准流程提取。Lipofectamine3000(Invitrogen)将5 μg MSLN-CAR转染质粒、3.75 μg PSPAX2包装质粒、1.25 μg PMD2.G包膜质粒转入293T细胞,48 h后收取病毒原液,置于4 ℃保存。

1.4 CART的制备及扩增

实验前1 d,用400 μL含抗CD3单克隆抗体(Biolegend,OKT3)和抗CD28单克隆抗体(Biolegend)的PBS液(各2 μg/mL)包被24孔板,贴封口膜4 ℃过夜。实验当天,用梯度离心法(GE Ficoll)提取健康供者PBMC,用RPMI1640完全培养基将PBMC细胞重悬(1×106/mL),移入预先包被抗体的24孔板中(2 mL/孔),置于孵箱培养24 h。小心吸去上清,将已收集并添加Polybrene(终浓度8 μg/mL,Yeasen)慢病毒液加入孔板内,孵箱内感染6 h后换成新鲜培养基(含人IL-2 200 IU/mL,Peprotech)。24 h后重复感染1次,48 h后通过流式细胞仪(Beckman,CytoFLEX)检测感染效率。将2×105个CART细胞与经辐照(40 Gy)的人PBMC细胞按1 :100混合,35 mL RPMI1640(含IL-2 200 IU/mL,OKT3 30 ng/mL)重悬于T-75培养瓶内,置于孵箱培养扩增,适时换液。

1.5 免疫组织化学染色观察

按照标准流程,将保存于本实验室生物样本库的24例乳头状浆液性卵巢癌(FIGO分级ⅡB以上)和3例正常卵巢组织石蜡包埋样本制成切片后,进行:脱蜡→抗原修复→血清封闭→一抗(鼠抗人MSLN,Abcam,EPR4509)→二抗(Dako REALTM EnVisionTM)→显色剂→复染→脱水→封片。全玻片扫描(Axio Scan.Z1),Image Pro Plus 6.0软件分析定量。

1.6 Western blot检测

哺乳动物蛋白抽提试剂盒M-PERTM(Thermo Fisher)收集全细胞样本,按标准流程提取蛋白并测浓度,经过电泳、转膜、封闭后孵鼠抗人CD3ζ链单克隆抗体(Santa Cruz,#Sc-1293)、鼠抗人MSLN单克隆抗体(Abcam,EPR4509)过夜、洗膜3次、兔抗鼠生物素化二抗(ZSGB)孵育,洗膜5次后滴加化学发光显色剂进行检测。

1.7 PCR检测

PCR检测CAR结构和MSLN基因表达,引物序列见表 1

表 1 引物序列及片段大小
引物名称 引物序列(5′→3′) 片段大小(bp)
引物1 正向: TCCGCGAGCTTTGTTTAA
反向: TCAGGAGGAATGCTGGGT
87
引物2 正向: GATGAGGCTGACTATTACTGT
反向: AGGTGTTTCCCTTTCACA
191
引物3 正向: GCAAGCATTACCAGCCCTAT
反向: CTCCTGCTGAACTTCACTCTG
73
引物4 正向: CACCTACGACGCCCTTCA
反向: GCTGGACCTGGATTGCTT
138
MSLN 正向: CTGGAAGCCTGCGTGGAT
反向: GGGTAACCTTGTGGGTAGAGC
128

细胞经离心沉淀用1×PBS洗2次后加1 mL TRIzol(Invitrogen)充分吹打后室温静止5 min,随后按照RNA提取标准流程进行,即加氯仿、异丙醇、乙醇纯化和沉淀,加无RNA酶DEPC水溶解并测浓度。逆转录步骤按照TMRT reagent Kit(TaKaRa)反转录试剂盒标准程序进行,1 μL cDNA用于qRT-PCR,反应体系按照SYBR® Green(Thermo Fisher)标准体系和步骤配制,Applied Biosystems Real-time PCR仪(Thermo Fisher)扩增,Bio-Rad Image Lab Software 5.2.1进行数据采集和分析,表达水平变化倍数按2-△△Ct值计算。

1.8 细胞毒性实验

卵巢癌细胞系SNU-119经慢病毒感染后稳定表达mCherry,调整细胞数为5 000个/μL。按照相应效靶比(E :T)调整CART细胞浓度。均匀地将1 μL靶细胞种植在96孔板孔底,保持液滴不干燥,30 min后小心地将相应比例的CART细胞加入并覆盖靶细胞,缓慢加入100 μL DMEM完全培养基,置于敷箱培养12 h。吸取E :T=1 :1组上清保存于-80 ℃冰箱。用PBS清洗孔板3次,置于荧光显微镜下拍照记录存活mCherry阳性细胞,Image Pro Plus 6.0软件进行存活细胞累积光密度(integrated optical density,IOD)定量分析。

1.9 细胞因子释放检测

解冻“细胞毒性实验”中获得的共培养上清,按Human IL-2 QuantiGlo ELISA Kit(R&D,# Q2000B)和Human TNF-α QuantiGlo ELISA Kit(R&D,# QTA00B)试剂盒操作步骤,检测IL-2和TNF-α水平。

1.10 动物实验

4~6周龄的雌性NOD/SCID小鼠购自中国协和医科大学实验动物学部,饲养于第三军医大学SPF级动物房。实验前25 d,将5×106表达mCherry荧光蛋白的SNU-119细胞接种于1只小鼠左侧腹股沟皮下。无菌条件下进行下列操作:瘤体体积为1 cm3左右时,脱颈处死小鼠并迅速分离肿瘤,用组织剪将肿瘤均匀分离为1 mm3的组织块,浸泡于灭菌的含1.0 % FBS的PBS液中。实验小鼠分为3组,每组6只,从左侧腹部做纵向切口暴露盆腔,探查左侧卵巢,用基质胶将1 mm3的肿瘤块粘附于卵巢,复原肠道组织后用基质胶粘合伤口。术后第7天进行小鼠活体成像检测成瘤,并分别于术后第7、15天经尾静脉回输各组T细胞(1×107/只)。分别于回输后第2天起,每隔7 d取小鼠尾静脉血20 μL,裂红细胞后进行染色(Biolegend),检查外周血CART细胞和相关细胞因子水平,并进行活体成像检测肿瘤体积,采用Living Image®4.4软件处理数据绘制肿瘤生长曲线。待肿瘤生长到1.5 cm3时处死小鼠,完整分离瘤体进行拍照。

1.11 统计学分析

采用GraphPad Prism 5.0软件,数据以x ±s表示。qPCR检测CAR融合基因的表达采用单因素方差分析,免疫组化检测卵巢癌与正常组织MSLN表达定量数据采用Student’s t检验,细胞因子释放水平数据采用单因素方差分析。检验水准:α=0.05。

2 结果 2.1 MSLN在相关肿瘤组织/细胞系中高表达

免疫组化检测卵巢癌(图 1A)MSLN表达水平:MSLN在正常卵巢组织中表达的表达量(6.4±1.2)显著低于卵巢癌组织[(449.1±1 089.0),P < 0.01]。通过qPCR(图 1B)和Western blot(图 1C)筛选出高表达MSLN的卵巢癌细胞系SNU-119和不表达MSLN的卵巢癌细胞系H08910,用于后续杀伤实验。

A:免疫组化检测MSLN在卵巢癌组织(左)与正常组织(右)中的表达(二步法);B:PCR检测卵巢癌细胞系中MSLN的表达a:P < 0.01,与A2780、H08910比较;C:Western blot检测卵巢癌细胞系中MSLN的表达 图 1 MSLN在人源肿瘤样本和细胞系中的表达水平

2.2 制备抗MSLN-CART细胞

采用分子克隆技术将该人源抗人MSLN的ScFv及CD3ζ链和CD28共刺激分子组成的融合链克隆到带绿色荧光蛋白(GFP+)标签的慢病毒载体中,命名为MSLN-CAR(图 2A),基因测序证明与设计完全吻合。采用HEK293T作为工具细胞进行慢病毒包装(图 2B),显示慢病毒包装效率。通过慢病毒感染体外激活的PBMC细胞(可被激活的PBMC为T细胞),获取带GFP标签并表达抗MSLN-CAR的T细胞(图 2C),命名为抗MSLN-CART细胞。

LTR:长末端重复序列;ψ:包装信号;SD:剪接供体;SA:剪接受体;VL:免疫球蛋白轻链可变区;VH:免疫球蛋白重链可变区;scFv:单链可变区片段;ζ-Chain: T细胞抗原受体-ζ链;IRES:内部核糖体进入位点;eGFP:绿色荧光蛋白;A:CAR融合基因结构示意图;B:荧光显微镜观察慢病毒包装效率;C:流式细胞术检测CD3+和GFP+双阳性CART细胞变化;D:PCR检测CAR融合基因mRNA的表达a:P < 0.01,与空载对照组比较;E:Western blot检测结果;F:细胞计数获得CART细胞体外扩增速率分析 图 2 CART细胞的制备、验证和扩增

2.3 抗MSLN-CART细胞验证

采取qPCR和Western blot两种方法对CAR融合基因/蛋白进行检测。首先,按照CAR融合基因的构成要素,设计4组引物,各引物扩增产物为CAR融合基因各要素片段的链接部位,即能够扩增该链接部位则证明相关要素在T细胞中表达。与慢病毒空载对照组比较,仅MSLN-CART细胞内表达了相关CAR融合基因片段(图 2D)。采用MSLN-CAR慢病毒及其空载对照分别感染HEK293T、Jurkat细胞、T细胞后,Western blot检测CD3ζ链。MSLN-CAR慢病毒感染的各细胞系中,都可以检测到大小为70×103、含有CD3ζ分子的CAR融合蛋白,而在Jurkat和T细胞中则能检测到19×103大小的内生CD3ζ链(图 2E)。

采用CART细胞“快速扩增法”在3周内将2×105个CART细胞扩增到近1×1010(图 2F)。该扩增速率完全满足临床回输所需的细胞数量。

2.4 MSLN-CART细胞具有体外杀伤效能

mCherry荧光蛋白慢病毒载体感染SNU-119细胞,使其稳定表达mCherry荧光蛋白并作为杀伤实验靶细胞。将等量的靶细胞SNU-119-mCherry接种于96孔板内,按照图 3A设置效应细胞与靶细胞比例(效靶比,E :T),分别将普通激活T细胞、感染慢病毒空载T细胞、抗MSLN-CART细胞与SNU-119-mCherry细胞共培养,12 h后收集上清并在荧光显微镜下观察细胞存活情况(图 3A),采用Image Pro Plus 6.0软件定量各组累积光密度,获得杀伤效率曲线结果(图 3C)。与野生型T细胞组和空载对照组相比,抗MSLN-CART细胞杀伤效率显著增强,E :T从4 :1到1 :4之间的杀伤率为100%,即使在最低E :T(1 :16)时也能达到80%左右的杀伤效率。结果显示,CART细胞在体外对卵巢癌细胞杀伤效能显著增强。

A、B:荧光显微镜观察抗MSLN-CART对SNU-119和H08910细胞的毒性(×20);C:抗MSLN-CART对靶细胞SNU-119的杀伤率;D:抗MSLN-CART对靶细胞H08910的杀伤率;E、F:分别为ELISA法检测抗MSLN-CART与靶细胞SNU-119共培养上清IL-2、TNF-α的释放量1:空白对照组;2:T细胞组;3:空载对照组;4:抗MSLN-CART组;a:P < 0.01, 与空载对照组比较;b:P < 0.01,与T细胞组比较 图 3 抗MSLN-CART细胞体外杀伤效能

2.5 抗MSLN-CART细胞体外杀伤效能具有特异性

采用不表达MSLN并带mCherry荧光的卵巢癌细胞H08910作为靶细胞,按照图 3B设置的效靶比,分别将感染慢病毒空载T细胞和抗MSLN-CART细胞与H08910-mCherry细胞共培养,12 h后观察细胞存活情况(图 3B),采用Image Pro Plus 6.0软件定量各组累积光密度,获得杀伤效率曲线结果(图 3D),靶细胞为不表达MSLN的H08910时,空载细胞与抗MSLN-CART细胞杀伤效率无明显差别。结果显示,抗MSLN-CART细胞对MSLN阴性细胞杀伤效能未增强,即具有MSLN特异性。

2.6 体外抗MSLN-CART细胞促进细胞因子释放

CART细胞通过产生脱粒酶和穿孔素,并分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α杀灭靶细胞。取图 3A实验中E :T=1 :1组上清,检测相关细胞因子释放水平,可见抗MSLN-CART组IL-2、TNF-α水平更高(图 3EF),具有更强的细胞毒效应。

2.7 抗MSLN-CART细胞在体内对卵巢癌具有杀伤效能

将表达mCHerry卵巢癌细胞SNU-119皮下种植于NOD/SCID小鼠,待瘤体生长到1 cm3时将肿瘤均匀分离为1 mm3的组织块,种植到相应实验组小鼠卵巢,建立原位移植瘤模型。待活体成像确定原位移植成功后,给予各组T细胞回输。回输后严密观察小鼠,未见小鼠出现细胞因子释放综合征等副作用。回输后第15天,在T细胞缺陷的NOD/SCID小鼠外周血中成功检测到CART细胞(图 4A)。进一步通过活体成像,证实回输抗MSLN-CART细胞组肿瘤明细减小甚至消失(图 4B)。

A:流式细胞术检测抗MSLN-CART细胞在小鼠外周血中的变化;B:抗MSLN-CART细胞完全清除小鼠肿瘤细胞活体成像黑框内为卵巢原位移植瘤 图 4 抗MSLN-CART细胞体内杀伤效能

3 讨论

实体性肿瘤占人类肿瘤90%以上,而CART疗法治疗实体瘤的临床研究处于起步阶段。相关临床研究包括靶向癌胚抗原(CEA)治疗胃癌、胰腺癌和结直肠癌,靶向神经节苷脂-2(GD2)治疗神经母细胞瘤和骨肉瘤,靶向表皮生长因子受体(EGFR)治疗高级别胶质瘤等[21-22]。对于卵巢癌而言,可选择的TAA包括MSLN、人表皮生长因子受体-2(HER2)、叶酸受体(FR)和癌抗原125(CA125)[23]。其中,临床前研究证实,靶向MSLN的CART能够显著抑制荷卵巢癌小鼠肿瘤生长,促进多种细胞因子释放,甚至引发旁观者效应杀灭MSLN阴性肿瘤细胞[24]。宾夕法尼亚大学开展了T细胞瞬时表达MSLN mRNA治疗间皮瘤和胰腺癌的临床研究,结果显示,短暂表达CAR结构的CART细胞不仅体现出抗肿瘤效应,还能促进机体系统性细胞和体液免疫水平增强[25]。然而,由于研究者采用的CAR序列,来源于鼠源性单抗,患者出现了明显的过敏反应。因此,研究者建议在今后的临床试验中,应该采用人源性CART细胞做单次细胞注射。

既往已开展评估MSLN作为TAA的安全性研究[17, 25-26]。本研究对卵巢癌及对应癌旁组织进行了MSLN检测,得出了与既往研究[15]一致的结果,即:MSLN在卵巢癌等实体瘤中高表达,而在正常组织中则不表达或者低表达,体内实验结果更进一步证实靶向MSLN的CART治疗是安全的,可以进一步应用于临床试验。

异基因来源CAR结构所造成的转基因免疫原性炎症反应,是导致CART细胞在宿主体内续存时间短的重要原因。有研究表明,小鼠来源ScFv序列会引起严重的宿主抗移植物反应[27-28]。本研究采用人源抗MSLN的ScFv合成CAR结构,在免疫缺陷小鼠构建的肿瘤模型中,该CART细胞不仅展现出显著的肿瘤抑制能力,还可以在小鼠体内长期续存。

既往研究中,大多采用小鼠皮下移植瘤模型进行疗效评估,该模型适于观察瘤体变化和便于瘤内局部注射操作[29],然而其缺点也是非常明显的。为了更好地贴近临床实际,本研究选择建立小鼠原位卵巢移植瘤模型,更能反映和模拟人类肿瘤的实际生长情况。

成功实施CART过继免疫治疗,不仅要求获得特异性强、安全有效的CART细胞,对细胞的数量也有较高的要求:每位实体瘤患者需要回输1010数量级CART细胞才能发挥预期的抗肿瘤效应[30]。要实现这一目标,依赖于高效的体外制备和扩增技术。根据研究需求,本研究采用体外“快速扩增程序”,以异体来源PBMC细胞作为Feeder细胞,与CART细胞进行共培养,在3周内将2×105个CART细胞扩增到1×1010个。这些细胞形态和增殖能力良好,为下一步临床应用奠定基础。

CART治疗实体肿瘤还处于起步阶段,临床试验结果尚不尽如人意。截至目前,靶向MSLN的CART治疗卵巢癌的临床研究少见报道,相关研究有待推进。该领域的主要挑战包括:①寻找到合适的TAA,避免出现脱靶效应[31];②CAR融合基因设计不合理,造成CART细胞毒性较弱或者生存困难;③实体瘤肿瘤微环境对CART细胞产生抑制[22, 32];④肿瘤组织的异质性使瘤细胞TAA表达差异,尤其是原位癌与转移灶之间[22]。尽管还面临上述诸多挑战,CART疗法依然被研究者寄予厚望。本研究结果证实了抗MSLN-CART疗法在卵巢癌原位动物模型中的安全性和有效性,为进一步临床研究奠定了基础。

志谢: 感谢本院麻醉科甯交琳副教授的指导和帮助
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http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201802124
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

文章信息

杨永君, 李瑶, 尹立, 刘新东, 卞修武, 余时沧.
YANG Yongjun, LI Yao, YIN Li, LIU Xindong, BIAN Xiuwu, YU Shicang.
抗间皮素嵌合抗原受体修饰T细胞治疗卵巢癌的实验研究
Anti-mesothelin chimeric antigen receptor modified T cells for ovarian cancer
第三军医大学学报, 2018, 40(11): 945-953
Journal of Third Military Medical University, 2018, 40(11): 945-953
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201802124

文章历史

收稿: 2018-02-23
修回: 2018-03-17

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