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维吾尔族缺血性脑卒中患者CYP2C19*2基因多态性与氯吡格雷抵抗及卒中复发风险的相关性研究
郝晨光, 蔡坚     
830054 乌鲁木齐, 新疆医科大学第一附属医院神经内科
[摘要] 目的 探讨CYP2C19*2基因多态性与维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗及卒中复发风险的关系。方法 检测100例维吾尔族缺血性脑卒中患者CYP2C19*2基因型,分为纯合子野生型、杂合子突变型、纯合子突变型;使用血小板聚集功能检测仪测定血小板聚集率;于氯吡格雷治疗6个月时随访所有患者的卒中复发率。结果 根据基因分型,将研究对象分为纯合子野生型组(63例)、杂合子突变型组(32例)和纯合子突变型组(5例)。突变型组氯吡格雷抵抗的发生率及卒中复发率高于野生型组(P<0.05)。Logistic回归分析显示:CYP2C19*2等位基因是维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗及卒中复发的危险因素(OR=2.541,95%CI: 1.052~6.137,P=0.038;OR=4.741,95%CI: 1.273~7.392,P=0.045)。结论 CYP2C19*2基因多态性与维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗及卒中复发有相关性,CYP2C19*2等位基因是氯吡格雷抵抗及卒中复发的危险因素。
[关键词] CYP2C19*2基因     多态性     维吾尔族     缺血性脑卒中     氯吡格雷抵抗    
Correlation of CYP2C19*2 polymorphism with clopidogrel resistance and risk of stroke recurrence in Uygur patients with ischemic stroke
HAO Chenguang , CAI Jian     
Department of Neurology, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang Uygur Autonomous Region, 830054, China
Supported by the Foundation for Young Scholars of First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University (2014ZRQN07)
Corresponding author: HAO Chenguang, E-mail: esports918@163.com
[Abstract] Objective To explore the relationship of CYP2C19*2 polymorphism with clopidogrel resistance and risk of stroke recurrence in Uygur patients. Methods The CYP2C19*2 genotype was detected in 100 patients with ischemic stroke. According to their genotypes, the patients were divided into wild type group, heterozygous mutation group and homozygous mutation group. Platelet inhibitory rates were evaluated by platelet analyzer. The incidence rate of stroke recurrence was observed in the patients after clopidogrel treatment for 6 months. Results According to their genotypes, there were 63 patients (63%) assigned into wild type group, 32 (32%) into heterozygous mutation group and 5 (5%) into homozygous mutation group. The rates of clopidrogel resistance and stroke recurrence were significantly higher in the mutation groups than the wild type group (P<0.05). Logistic regression analysis showed the mutant allele of CYP2C19*2 was risk factor for clopidrogel resistance and stroke recurrence (OR=2.541, 95%CI: 1.052~ 6.137, P=0.038; OR=4.741, 95%CI: 1.273~7.392, P=0.045). Conclusion CYP2C19*2 gene polymorphisms are associated with clopidogrel resistance and stroke recurrence in Uygur patients with ischemic stroke. The mutant alleles of CYP2C19*2 is risk factor for clopidrogel resistance and stroke recurrence.
[Key words] CYP2C19*2 gene     polymorphism     Uygur     ischemic stroke     clopidrogel resistance    

缺血性脑卒中存活患者中有40%以上可复发,且复发次数越多,病死率和致残率越高。2014年美国医学协会将氯吡格雷推荐为非心源性缺血性脑卒中的二级预防用药[1],然而氯吡格雷的抗血小板效应存在明显的个体差异,部分患者存在氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance, CR)[2]。氯吡格雷抵抗会降低氯吡格雷二级预防的疗效,增加脑卒中复发的风险。CYP2C19基因多态性是氯吡格雷抵抗的重要影响因素[3-6],CYP2C19*2是发生突变频率最高的位点[7]。国内所报道的氯吡格雷抵抗与CYP2C19基因多态性关系的研究对象主要是汉族脑卒中患者。本研究旨在发现CYP2C19*2基因多态性与维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗及卒中复发的关系,从而为从药物基因组学角度指导维吾尔族患者正确服用氯吡格雷提供依据。

1 资料与方法 1.1 临床资料

于2015年1月至2016年9月,选取100例维吾尔族缺血性脑卒中患者为观察对象,其中男性73例,年龄为(60.8±9.1)岁,女性27例,年龄为(61.1±7.6)岁。合并高血压64例,糖尿病29例;有吸烟史29例,有饮酒史11例。纳入标准:①符合中华医学会神经病学分会脑血管病组制定的诊断标准[8],并经头颅MRI检查结果证实; ②服用氯吡格雷75 mg/d,连续服用超过7 d。本研究上报至医院医学伦理委员会并获得了批准(20150828-11),且所有观察对象知情并自愿参与本次研究,签署知情同意书。排除标准:①对氯吡格雷过敏或不能耐受者;②近期有出血倾向者;③有严重肝脏疾病或凝血功能障碍者;④严重肾功能不全;⑤近1个月内有重大外科手术者。

1.2 CYP2C19*2基因型检测

应用EDTA抗凝采血管于晨起空腹抽取静脉血4 mL,血液标本采集后及时送至新疆医科大学第一附属医院药学研究室检测。操作流程包括样本DNA的分离和纯化、PCR扩增、扩增产物杂交检测等。在采集淋巴细胞基因DNA后进行PCR扩增,采用CYP2C19试剂盒(百傲科技生物)分析PCR代谢产物,进而判断各基因型。CYP2C19*2基因型包括:纯合子野生型(*1/*1)、杂合子突变型(*1/*2)和纯合子突变型(*2/*2)。

1.3 血小板聚集功能检测

应用PL-12全自动血小板聚集功能检测仪(神州英诺华医疗科技公司)测定血小板聚集率,以血小板最大聚集率(max aggregation ratio, MAR)≥55%定义为氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance, CR),MAR<55%定义为氯吡格雷非抵抗(non-clopidogrel resistance, NCR)。

1.4 卒中复发率随访

所有患者于接受氯吡格雷治疗6个月时随访卒中复发情况。由2名神经内科专科医师根据病史、症状、体征及头颅MRI检查结果做出判断。

1.5 统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件,计数资料行χ2检验,用Hardy-Weinberg检验各基因型频率,氯吡格雷抵抗因素及卒中复发因素行Logistic回归分析。检验水准:α=0.05。

2 结果 2.1 基因型构成及分组

100例维吾尔族缺血性脑卒中患者根据基因型分为纯合子野生型组(CYP2C19*1/*1)63例、杂合子突变型组(CYP2C19*1/*2)32例、纯合子突变型组(CYP2C19*2/*2)5例(5%)。各基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.141,P=0.372;图 1)。

A:纯合子野生型(CYP2C19*1/*1);B:杂合子突变型(CYP2C19*1/*2);C:纯合子突变型(CYP2C19*2/*2) 图 1 基因型生物芯片识别图

2.2 两组维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗发生率

突变型组发生氯吡格雷抵抗的发生率高于野生型组(χ2=4.078,P=0.043;表 1)。

表 1 两组维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗发生率
组别 n CR(例) NCR(例) CR发生率(%)
野生型组(*1/*1) 63 18 45 28.6(18/63)a
突变型组(*1/*2+*2/*2) 31 48.6(18/37)
a:χ2=4.078,P=0.043,与突变型组比较

2.3 两组维吾尔族缺血性脑卒中患者卒中复发率

突变型组卒中复发率高于野生型组(χ2=5.165,P=0.023;表 2)。

表 2 两组维吾尔族缺血性脑卒中患者卒中复发率
组别 n 卒中复发(例) 卒中未复发(例) 卒中复发率(%)
野生型组(*1/*1) 63 4 59 6.3(4/63)a
突变型组(*1/*2+*2/*2) 37 7+2 25+3 24.3(9/37)
a:χ2=5.165,P=0.023,与突变型组比较

2.4 CYP2C19*2等位基因基因型与维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗的关系

Logistic回归分析显示:CYP2C19*2等位基因是维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗的危险因素(OR=2.541,95% CI: 1.052~6.137,P=0.038;表 3)。

表 3 CYP2C19*2不同基因型与维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗因素的Logistic回归分析
因素 OR 95%CI P
性别 2.216 0.733~6.705 0.159
年龄 1.020 0.966~1.077 0.480
糖尿病 1.564 0.564~4.334 0.390
高血压 1.221 0.49~3.04 0.669
吸烟史 0.888 0.267~2.955 0.847
饮酒史 0.804 0.063~1.472 0.139
CYP2C19*2等位基因 2.541 1.052~6.137 0.038

2.5 CYP2C19*2等位基因与维吾尔族缺血性脑卒中患者卒中复发的关系

Logistic回归分析显示:CYP2C19*2等位基因是维吾尔族缺血性脑卒中患者卒中复发的危险因素(OR=4.741,95% CI: 1.273~7.392,P=0.045;表 4)。

表 4 CYP2C19*2不同基因型与维吾尔族缺血性脑卒中患者卒中复发因素的Logistic回归分析
因素 OR 95%CI P
糖尿病 0.242 0.054~1.312 0.785
高血压 0.996 0.962~1.114 0.432
CYP2C19*2等位基因 4.741 1.273~7.392 0.045

3 讨论

氯吡格雷是临床上广泛应用于缺血性脑卒中的抗血小板药物,氯吡格雷抵抗会增加脑血管缺血事件的发生[9],已成为研究的热点,但氯吡格雷抵抗的具体机制尚不完全清楚。因CYP2C19酶在氯吡格雷代谢中发挥着最为重要的作用,故CYP2C19基因多态性对氯吡格雷抵抗及卒中复发的影响越来越受到关注。

CYP2C19基因主要的突变位点包括CYP2C19*2、*3、*4、*5、*17。CYP2C19*2、*3、*4、*5发生突变可降低CYP2C19酶的活性[10],CYP2C19*17发生突变可增加CYP2C19酶的活性[11]。CYP2C19*2是突变频率最高的位点。CYP2C19*2是由于外显子5第681位碱基由鸟嘌呤突变为腺嘌呤,由于终止密码子的产生时间提前而终止了蛋白质的继续合成,致CYP2C19酶活性下降或失效,减少了氯吡格雷活性代谢产物对血小板ADP受体的阻断,最终抗血小板聚集的作用明显下降[12]

CYP2C19*2是失功能等位基因类别中最为常见的,但其在不同种族人群的突变频率也不尽相同,如高加索人的突变频率约为12.0%,非裔美国人约为15.0%;亚洲人的突变频率最高(约为30.0%)[13]。携带CYP2C19*2失功能等位基因的缺血性脑卒中患者中,氯吡格雷抵抗的发生率明显高于CYP2C19基因型为野生型的患者[14]

本研究发现维吾尔族缺血性脑卒中患者中携带CYP2C19*2等位基因的突变型组氯吡格雷抵抗的发生率及卒中的复发率均高于野生型组,CYP2C19*2等位基因是维吾尔族缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗的危险因素(OR=2.541,95% CI: 1.052~6.137,P=0.038),也是卒中复发的危险因素(OR=4.741,95%CI: 1.273~7.392,P=0.045)。换言之,携带CYP2C19*2等位基因的突变型患者卒中复发的风险是野生型的4.74倍,这与国内外报道的结果相似[15-18];CYP2C19基因多态性与缺血性脑卒中患者氯吡格雷抵抗存在相关性,携带CYP2C19失功能等位基因的患者再发脑卒中的风险明显升高。

维吾尔族是新疆人口最多的少数民族,与汉族有着种族差异,其长期生活的新疆地区地处祖国西北内陆,具有特殊的气候、地理特点,其文化背景、生活习惯与汉民族明显不同,这些因素导致维吾尔族脑卒中的患病率高于汉族人群[19],有大量维吾尔族患者需要治疗。本研究为根据CYP2C19基因型指导维吾尔族缺血性脑卒中患者个体化服用氯吡格雷提供了依据,这对于避免氯吡格雷抵抗的发生,降低脑卒中的复发率,从而降低脑卒中的致残率及病死率具有非常重要的意义,但本研究样本例数较少,且未研究CYP2C19基因其他位点变异对氯吡格雷抵抗及卒中复发的影响,且病例随访时间较短,所得数据可能存在偏倚。随着对氯吡格雷抵抗及其所致的卒中复发风险研究的不断深入,相信在基因水平上氯吡格雷抵抗及卒中复发研究将会成为热点和重点。

参考文献
[1] SAVER J L, CARROLL J D, SMALLING R, et al. Letter by Saver et al regarding article, "Guidelines for the prevention of stroke in patients with stroke and transient ischemic attack: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association"[J]. Stroke, 2015, 46(4): e85–e86. DOI:10.1161/STROKEAHA.115.007311
[2] WIVIOTT S D, ANTMAN E M. Clopidogrel resistance: a new chapter in a fast-moving story[J]. Circulation, 2004, 109(25): 3064–3067. DOI:10.1161/01.CIR.0000134701.40946.30
[3] TAN D S, YEO A H, HO H K, et al. Asian study of clopidogrel (ASCLOP) responsiveness: the contributions of genetic and non-genetic factors[J]. Int J Cardiol, 2014, 171(2): e21–e23. DOI:10.1016/j.ijcard.2013.11.126
[4] LIN Y J, LI J W, ZHANG M J, et al. The association between CYP2C19 genotype and of in-stent restenosis among patients with vertebral artery stent treatment[J]. CNS Neurosci Ther, 2014, 20(2): 125–130. DOI:10.1111/cns.12173
[5] JEONG H E, LEE S J, CHA E Y, et al. Development of a multiplex and cost-effective genotype test toward more personalized medicine for the antiplatelet drug clopidogrel[J]. Int J Mol Sci, 2014, 15(5): 7699–7710. DOI:10.3390/ijms15057699
[6] GUO B, TAN Q, GUO D, et al. Patients carrying CYP2C19 loss of function alleles have a reduced response to clopidogrel therapy and a greater risk of in-stent restenosis after endovascular treatment of lower extremity peripheral arterial disease[J]. J Vasc Surg, 2014, 60(4): 993–1001. DOI:10.1016/j.jvs.2014.03.293
[7] WANG X Q, SHEN C L, WANG B N, et al. Genetic polymorphisms of CYP2C19 2 and ABCB1 C3435T affect the pharmacokinetic and pharmacodynamic responses to clopidogrel in 401 patients with acute coronary syndrome[J]. Gene, 2015, 558(2): 200–207. DOI:10.1016/j.gene.2014.12.051
[8] 中华医学会神经病学分会脑血管病学组急性缺血脑卒中诊治指南撰学组. 中国急性缺血性脑卒中诊治指南2010[J]. 中国医学前沿杂志(电子版), 2010, 2(4): 50–59, 69.
Writing Group for Acute Ischemic Stroke Diagnosis and Treatment Guideline of Cerebrovascular Disease Group of Neurology Branch, Chinese Medical Association. Diagnosis and treatment guideline of acute ischemic stroke of China(2010)[J]. Chin J Front Med Sci(electronic version), 2010, 2(4): 50–59, 69. DOI:10.3969/j.issn.1674-7372.2010.04.012
[9] FIFI J T, BROCKINGTON C, NARANG J, et al. Clopidogrel resistance is associated with thromboembolic complications in patientsundergoing neurovascular stenting[J]. Am J Neuroradiol, 2013, 34(4): 716–720. DOI:10.3174/ajnr.A3405
[10] PETTERSEN A A R, ARNESEN H, OPSTAD T B, et al. The influence of CYP 2C19*2 polymorphism on platelet function testing during single antiplatelet treatment with clopidogrel[J]. Thromb J, 2011, 9: 4. DOI:10.1186/1477-9560-9-4
[11] SIBBING D, KOCH W, GEBHARD D, et al. Cytochrome 2C19*17 allelic variant, platelet aggregation, bleeding events, and stent thrombosis in clopidogrel-treated patients with coronary stent placement[J]. Circulation, 2010, 121(4): 512–518. DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.109.885194
[12] SCOTT S A, KATRIN S, SHULDINER A R, et al. PharmGKB summary: very important pharmacogene information for cytochrome P450, family 2, subfamily C, polypeptide 19[J]. Pharmacogenet Genomics, 2012, 22(2): 159–165. DOI:10.1097/FPC.0b013e32834d4962
[13] SCOTT S A, SANGKUHL K, STEIN C M, et al. Clinical pharmacogenetics implementation consortium guidelines for CYP2C19 genotype and clopidogrel therapy: 2013 update[J]. Clin Pharmacol Ther, 2013, 94(3): 317–323. DOI:10.1038/clpt.2013.105
[14] ZHANG S, LAI X, LI W, et al. VASP phosphorylation and genetic polymorphism for clopidogrel resistance in Chinese patients with non-cardioembolic ischemic stroke[J]. Thromb Res, 2014, 134(6): 1272–1277. DOI:10.1016/j.thromres.2014.10.001
[15] JEONG T D, KIM SM, KIM H J, et al. CYP2C19 genotype and early ischemic lesion recurrence in stroke patients treated with clopidogrel[J]. J Stroke Cerebrovasc Dis, 2015, 24(2): 440–446. DOI:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2014.09.014
[16] PAN Y, CHEN W, XU Y, et al. Genetic polymorphisms and clopidogrel efficacy for acute ischemic stroke or transient ischemic attack: a systematic review and meta-analysis[J]. Circulation, 2017, 135(1): 21–33. DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.116.024913
[17] WANG Y, ZHAO X, LIN J, et al. Association between CYP2C19 loss-of-function allele status and efficacy of clopidogrel for risk reduction among patients with minor stroke or transient ischemic attack[J]. JAMA, 2016, 316(1): 70–78. DOI:10.1001/jama.2016.8662
[18] HOH B L, GONG Y, MCDONOUGH C W, et al. CYP2C19 and CES1 polymorphisms and efficacy of clopidogrel and aspirin dual antiplatelet therapy in patients with symptomatic intracranial atherosclerotic disease[J]. J Neurosurg, 2016, 124(6): 1746–1751. DOI:10.3171/2015.6.JNS15795
[19] 周晓辉, 张小宁, 郝晨光, 等. 新疆地区维吾尔族和汉族50岁以上人群脑卒中及血管性痴呆流行病学调查[J]. 中华流行病学杂志, 2008, 29(10): 1049–1050.
ZHOU X H, ZHANG X N, HAO C G, et al. Epidemic investigation of prevalence of stroke and vascular dementia among uygur and Han nationalities(≥50 years)in Xinjiang[J]. Chin J Epidemiol, 2008, 29(10): 1049–1050. DOI:10.3321/j.issn:0254-6450.2008.10.023
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201710188
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郝晨光, 蔡坚.
HAO Chenguang, CAI Jian.
维吾尔族缺血性脑卒中患者CYP2C19*2基因多态性与氯吡格雷抵抗及卒中复发风险的相关性研究
Correlation of CYP2C19*2 polymorphism with clopidogrel resistance and risk of stroke recurrence in Uygur patients with ischemic stroke
第三军医大学学报, 2018, 40(6): 523-527
Journal of Third Military Medical University, 2018, 40(6): 523-527
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201710188

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收稿: 2017-10-26
修回: 2017-12-13

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