0
文章快速检索  
高级检索
应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变
胡韦维1, 李进2, 刘益1, 刘之岱3, 张娟3, 余朝文3, 邹琳3, 张鹏辉1     
1. 400014 重庆, 重庆医科大学附属儿童医院检验科, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地, 重庆市干细胞治疗工程技术研究中心;
2. 400042 重庆, 陆军军医大学(第三军医大学)第三附属医院(野战外科研究所)检验科;
3. 400014 重庆, 重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心
[摘要] 目的 应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis, MMCA), 建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法 收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例, 女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血, 采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变, 以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片, 采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中, G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%, 与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917, P < 0.05);但女性的灵敏度仅10%, 特异性100%, 与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127, P < 0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%, 特异性100%, 与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891, P < 0.05);女性的灵敏度100%, 特异性100%, 与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000, P < 0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754), G6PD酶活性均正常。结论 与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较, MMCA法检测杂合子灵敏度更高, 可用于G6PD缺乏症杂合子筛查, 为一种简便、准确的诊断新方法。
[关键词] 多色探针熔解曲线分析法     G6PD缺乏症     杂合子     基因诊断    
Detection of gene mutation in heterozygous of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency by multicolor melting curve analysis
HU Weiwei1 , LI Jin2 , LIU Yi1 , LIU Zhidai3 , ZHANG Juan3 , YU Chaowen3 , ZOU Lin3 , ZHANG Penghui1     
1. Department of Clinical Laboratories, Ministry of Education Key Laboratory of Child Development and Disorders, China International Science and Technology Cooperation Base of Development and Critical Disorders, Chongqing Engineering Research Center of Stem Cell Therapy, Children's Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing, 400014;
2. Department of Clinical Laboratory, Institute of Surgery Research, Third Affiliated Hospital, Army Medical University (Third Military Medical University), Chongqing, 400042;
3. Center for Clinical Molecular Medicine, Children's Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing, 400014, China
Supported by the Special Project of Social People's Livelihood and Science and Technology Innovation of Chongqing (CSTC2016shmszx130032)
Corresponding author: ZHANG Penghui, Tel:86-23-63631417, E-mail:zhangph7203@sina.com
[Abstract] Objective To establish a rapid clinical method for detecting the heterozygote with glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency by multicolor melting curve analysis (MMCA). Methods A total of 429 children (342 males and 87 females) suspected with G6PD deficiency who lived in Chongqing region and visited our Children's Hospital between January 2015 and July 2016 were collected in this study.G6PD/6PGD quantitative ratio test and MMCA were applied respectively to determine the enzyme activity and G6PD gene mutation, and Sanger sequencing was also employed as gold standard method.At the same time, totally 1 754 peripheral blood filter papers from women recruited from Chongqing region were identified by MMCA for G6PD deficiency disease screening. Results Among the 429 cases suspected with G6PD deficiency, G6PD/6PGD ratio test showed the sensitivity and specificity were 96.8% and 100% respectively for the male, which were consistent with the results of Sanger sequencing (Kappa=0.917, P < 0.05);while the sensitivity and specificity were only 10% and 100% for the female, inconsistent with the results of Sanger sequencing (Kappa=0.127, P < 0.05).MMCA showed the sensitivity and specificity were 95.7% and 100% respectively for the male, consistent with Sanger sequencing (Kappa=0.891, P < 0.05);and were 100% and 100% for the female, which were in good agreement with Sanger sequencing (Kappa=1.000, P < 0.05).The heterozygotes accounted for 1.14% (20/1 754), with normal activity of G6PD enzyme. Conclusion Compared with the traditional method quantitative ratio of G6PD/6PGD, MMCA assay can screen the heterozygote with higher sensitivity, and is a simple and accurate new diagnostic method.
[Key words] multicolor melting curve analysis     G6PD deficiency     heterozygote     genetic diagnosis    

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)缺乏症, 是最常见的红细胞酶缺陷病之一。全世界约有4亿人受累, 中国南方地区高发[1]。在女性G6PD缺乏症患者中, 杂合子比例较高。所以女性杂合子检测具有重要意义:①女性杂合子自身有发病风险; ②女性G6PD杂合子比未携带突变的正常新生儿更容易发生新生儿高胆红素血症, 重者可发生新生儿黄疸或核黄疸, 导致神经系统永久性损伤甚至死亡[2-3]; ③在吃蚕豆或服用氧化性药物等一些诱因下, 孕期或哺乳期的女性杂合子可能发生胎儿流产或死胎[4]; ④G6PD缺乏症杂合子可能因漏诊而忽视早期的诊断和预防, 女性患儿成年后再生育面临流产等风险, 而且男性患儿的病因多遗传自母亲, 因此女性杂合子的检出对于远期防治G6PD缺乏就显得尤为重要。目前G6PD缺乏症最常用的诊断方法是G6PD/6PGD定量比值法, 而在中国G6PD缺乏症高发地区女性杂合子实际检出率很低[5-7], 需要一种新的诊断方法来提高女性杂合子的检出率。

多色探针熔解曲线分析(multicolor melting curve analysis, MMCA)法是一种利用改良分子探针对PCR产物进行实时分析的突变检测技术, 作为检测基因突变的新型方法之一, 已广泛应用于地中海贫血与G6PD缺乏症基因检测[8-9], 但利用该方法在G6PD缺乏症杂合子中的应用未见报道。本文先收集429例疑似G6PD缺乏症患者标本, 采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测G6PD酶活性和基因突变; 与金标准Sanger测序法结果比较, 评价MMCA法在G6PD缺乏症杂合子中的应用, 旨在建立一种快速筛查G6PD缺乏症杂合子的临床方法。再用MMCA法筛查重庆地区部分女性G6PD基因, 了解杂合子所占比例, 探讨进行女性G6PD检测的最佳临床筛查方案。

1 对象与方法 1.1 对象

从2015年1月至2016年7月, 收集重庆医科大学附属儿童医院429例(男性342例, 女性87例)疑似G6PD缺乏症患儿的EDTA抗凝血2 mL; 疑似患儿纳入标准:用荧光分析法测定儿童的末梢血滤纸片, G6PD浓度低于2.4 mg/dL[10]。同时收集进行G6PD缺乏症筛查的1 754份女性儿童末梢血滤纸片, 召回阳性患者采集EDTA抗凝血2 mL。

1.2 方法

1.2.1 试剂和仪器

G6PD酶活性测定试剂盒购于中国广东中山生物工程有限公司; G6PD基因突变检测试剂盒购于厦门致善生物科技有限公司; UV-1700紫外分光光度计购自日本岛津公司; Lab-Aid 820全自动核酸提取仪购于厦门致善生物科技有限公司; SLAN-96P Real-Time PCR购自上海宏石医疗科技公司。

1.2.2 G6PD酶活性检测

采用G6PD酶活性测定试剂盒, 严格按照说明书检测G6PD酶活性。应用UV-1700紫外分光光度计, 于650 nm波长处分别测定G6PD光密度值A1与6PGD的光密度值A2, 并计算G6PD/6PGD的比值(A1/A2)来判读G6PD酶是否缺乏。试剂盒参考值1.00~1.67, 本实验室将A1/A2比值≥1.0判读为阴性, 比值< 1.0为阳性。

1.2.3 MMCA法检测G6PD基因突变

应用全自动核酸提取仪提取末梢血滤纸片和外周静脉血的DNA[6]。采用G6PD基因突变检测试剂盒, 每份样本加入25 μL DNA到2个PCR反应体系, 每个体系包含四色荧光探针, 在SLAN-96P Real-Time PCR仪上检测, 根据样本与野生型对照熔解峰差异判读G6PD基因突变。MMCA是采用荧光PCR熔解曲线法, 可同时测16种常见G6PD基因突变类型, 包括c.95A>G、c.383T>C、c.392G>T、c.487G>A、c.493A>G、c.517T>C、c.519C>T、c.592 C>T、c.871G>A、c.1004C>A、c.1024C>T、c.1360C>T、c.1376G>T、c.1381G>T、c.1387C>T、c.1388G>A。结果判读:比较待测样本与野生型对照的熔解峰之间熔点(Tm值)的差异, 当Δ Tm值在±1 ℃即为野生型峰, 超过±2 ℃为突变型峰。通过查阅人类基因突变数据库(human gene mutation database, HGMD)及文献[10]鉴定每个突变位点的性质和蛋白功能改变。

1.2.4 G6PD基因突变全基因组测序

应用Sanger测序法对G6PD基因的2~12外显子及外显子-内含子的剪切区域进行测序分析。参考本实验室公用PCR引物[10], 对每个样本进行PCR扩增。PCR扩增总体积为25 μL, 包括基因组DNA 2 μL, 2×Premix Taq酶12.5 μL, 上下游引物各0.75 μL, ddH2O 9 μL。反应条件为:95 ℃ 3 min; 95 ℃ 30 s、58~65 ℃退火30 s、72 ℃ 30~40 s, 共35个循环; 72 ℃ 10 min, 4 ℃。PCR产物送华大基因公司测序。

1.2.5 数据分析与统计

根据G6PD/6PGD比值结果与MMCA基因检测结果, 采用配对四格表χ2检验, 用SPSS 19.0统计软件, 进行Kappa一致性分析, 检验水准α=0.05。

2 结果 2.1 429例疑似G6PD缺乏症患者酶活性和基因突变检测情况

429例疑似G6PD缺乏症患者中, 包含342例男性和87例女性。运用MMCA法检测出297例阳性患者(表 1), 包括9种基因突变类型, 267例男性半合子, 3例女性纯合子, 27例女性杂合子。通过查阅人类基因突变数据库, 每个突变位点均发生错义突变, 导致相应氨基酸的改变。除9例男性半合子外, 其余男性半合子和女性纯合子用G6PD/6PGD定量比值法检测G6PD酶活性均降低。这9例男性标本包含4例c.1388G>A、4例c.1024C>T和1例c.1376G>T突变, 通过查阅文献[9]及问病史可知, G6PD酶活性出现假阴性的原因有以下两点:第一, 患者在抽静脉血之前1 d有输血史; 第二, 患者是新生儿黄疸, 在急性溶血期由于新生红细胞G6PD酶活性偏高导致酶学检测结果偏高, 造成假阴性。而27例女性杂合子G6PD酶活性均正常。

表 1 429例疑似G6PD缺乏症患者检测结果
基因突变类型 氨基酸变化 男性半合子例数 女性纯合子例数 女性杂合子例数
c.95A>G P.H32R 22 2 9
c.383T>C P.L128P 3 0 0
c.392G>T P.G131V 3 0 0
c.487G>A P.G163S 9 0 0
c.871G>A P.V291M 6 0 0
c.1004C>A P.A335N 3 0 0
c.1024C>T P.L342F 46 0 6
c.1376G>T P.R459L 76 0 3
c.1388G>A P.R459L 98 1 9
c.1376G>T/c.1388G>A P.R459L/ P.R459L 1 0 0
变异类型均为错义突变; 男性半合子中有9例患者G6PD/6PGD>1.0, 包括4例c.1388G>A, 1例1376G>T和4例1024C>T, 其余G6PD/6PGD < 1.0;女性纯合子G6PD/6PGD < 1.0;女性杂合子G6PD/6PGD≥1.0

2.2 G6PD/6PGD定量比值法与Sanger测序法检测结果比较

作为G6PD缺乏症基因诊断的金标准, Sanger测序法验证所有429例疑似G6PD缺乏症患者的基因结果, 从而对G6PD/6PGD定量比值法进行方法学评价(表 23), 342例男性的灵敏度是96.8%、特异性是100%、阳性预测值为100%、阴性预测值为87.5%;87例女性的灵敏度仅10%、特异性是100%、阳性预测值为100%、阴性预测值为67.9%。用配对四格表的卡方检验统计分析, 男性用两种方法诊断结果一致性好(Kappa=0.917, P < 0.05);女性用两种方法诊断结果一致性差(Kappa=0.127, P < 0.05)。

表 2 G6PD/6PGD比值法和Sanger测序法检测342例男性结果比较
G6PD/6PGD Sanger测序 合计
+ -
+ 270 0 270
- 9 63 72
合计 279 63 342
+:G6PD/6PGD < 1, MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因突变; -:G6PD/6PGD比值大于1, MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因正常

表 3 G6PD/6PGD比值法和Sanger测序法检测87例女性结果比较
G6PD/6PGD Sanger测序 合计
+ -
+ 3 0 3
- 27 57 84
合计 30 57 87
+:G6PD/6PGD < 1, MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因突变; -:G6PD/6PGD比值大于1, MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因正常

2.3 MMCA法与Sanger测序法检测G6PD基因的结果比较

同理用MMCA法检测429例疑似G6PD缺乏症患者的基因, 从而对MMCA进行方法学评价(表 45)。针对其中342例男性, MMCA法检测G6PD的灵敏度为95.7%, 特异性为100%, 阳性预测值为100%, 阴性预测值为84%。针对87例女性, MMCA法检测G6PD的灵敏度为100%, 特异性为100%, 阳性预测值为100%, 阴性预测值为100%。用配对四格表的卡方检验统计分析, 男性患者用两种方法诊断结果一致性较好(Kappa=0.891, P < 0.05);女性用两种方法诊断结果完全吻合(Kappa=1.000, P < 0.05)。表 4可见有12例男性患者用MMCA法检测出现假阴性, Sanger测序法显示1例intron5:c.486-34 del T突变杂合子(缺失突变); 5例c.1311 C>T突变纯合子复合intron11:c.1365-13T>C突变纯合子(多态位点变异)和6例c.1311 C>T突变杂合子(p.Y437Y, 同义突变), 共3种突变类型(图 1)。表 5显示30例女性阳性患者中, 杂合子27例, 检出率高达90%(27/30)。

表 4 MMCA法与Sanger测序法对342例男性患者判定结果
MMCA Sanger测序 合计
+ -
+ 267 0 267
- 12 63 75
合计 279 63 342
+:MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因突变;
-:MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因正常

表 5 MMCA法与Sanger测序法对87例女性患者判定结果
MMCA Sanger测序 合计
+ -
+ 30 0 30
- 0 57 57
合计 30 57 87
+:MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因突变;
-:MMCA和Sanger测序检测出G6PD基因正常

A:intron5:c.486-34 del T突变杂合子; B、C:c.1311 C>T突变纯合子复合intron11:c.1365-13T>C突变纯合子; D:c.1311 C>T突变杂合子; 红色方框和黑色箭头为突变所在位置 图 1 Sanger测序法与MMCA法不一致标本的测序结果

2.4 重庆地区女性G6PD基因突变检测情况

采用MMCA法对重庆地区1 754份女性末梢血滤纸片进行G6PD基因检测, 其中22份标本发生基因突变, 杂合子20例, 纯合子2例, 女性杂合子突变率为1.14%(20/1 754)。22份G6PD基因突变标本分别用G6PD/6PGD定量比值法和Sanger测序法检测, 只有2例纯合子G6PD酶活性缺乏, 20例杂合子G6PD酶活性均正常。Sanger测序结果与MMCA法检测结果完全一致, 见表 6

表 6 MMCA筛查女性G6PD基因突变结果
基因型 表型 人数 频率
XgXg 正常 1 732 98.75%
XGXg 正常 20 1.14%
XGXG 异常 2 0.114%

3 讨论

G6PD缺乏症是遗传性疾病, 在服用蚕豆和多种氧化药物等诱因下会发病, 目前尚无根治疗法, 主要对人群进行筛查来预防疾病的发生。我国现在最常用的G6PD缺乏症的筛查方法是:先用荧光斑点法和G6PD/6PGD定量比值法初筛G6PD酶活性, 阳性患者再用Sanger测序法确诊G6PD基因突变, 该方案对女性杂合子的检出率较低。虽然很多文献报道了提高女性杂合子检出率的酶学诊断方法[11], 但是根据G6PD缺乏症的发病机制是X染色体连锁不完全显性遗传, 男性G6PD缺乏症患者只有1条X染色体, 所以临床表现出酶活性显著降低的半合子; 而女性有2条X染色体, 所以女性存在正常、杂合子和纯合子3种类型, 且大部分女性G6PD缺乏症都是杂合子, 其G6PD酶活性变化范围大, 可表现为正常、中度缺乏或显著缺乏[12]。由此推测, 只筛查G6PD酶活性会漏诊表型正常的女性杂合子。本研究429例疑似G6PD缺乏症患者采用G6PD/6PGD定量比值法与MMCA法分别检测G6PD酶活性与基因型, 除9例患者有输血史和发生新生儿黄疸导致G6PD酶活性一过性增高外, 其余男性半合子G6PD酶活性均降低; 而女性杂合子的G6PD酶活性均正常, 酶活性与基因型不一致。因此在G6PD缺乏症的诊断中, 只有对所有女性进行G6PD基因检测才能提高杂合子的检出率。

MMCA法具有许多优点:①高通量, 简单快捷; ②闭管操作, 无需PCR后处理, 减少了污染; ③生成结果自动判读, 减少人为因素的判读失误; ④成本价格更低。与基因诊断的金标准Sanger测序相比, 不需要大型昂贵的仪器设备, 成本更低, 更适合临床大规模的基因筛查。郝颖等[8]运用MMCA法检测β地中海贫血, 灵敏度和特异性都高, 能对常用的反向斑点杂交技术进行有效补充。同样用MMCA法也检测G6PD缺乏症, 具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点, 可用于G6PD缺乏症的临床辅助诊断[9]

本研究中首先采用G6PD/6PGD定量比值和MMCA法对429例疑似G6PD缺乏症患者进行G6PD酶活性和基因检测, 再用Sanger测序法作为金标准, 评价两种检测方法。对男性而言, 用G6PD/6PGD定量比值法检测的灵敏度96.8%, 特异性100%, 与金标准的一致性好; 用MMCA法检测的灵敏度95.7%, 特异性100%, 与金标准的一致性好。表明用这两种方法检测男性的灵敏度和特异性都高, 可以先用G6PD/6PGD定量比值法初筛, 再用Sanger测序法确诊G6PD基因突变的传统方案来诊断男性G6PD缺乏症。对女性而言, 用G6PD/6PGD定量比值法检测的灵敏度仅为10%, 特异性100%, 与金标准的一致性差; 用MMCA法检测的灵敏度100%, 特异性100%, 与金标准完全吻合。这反映了在女性患者检测中G6PD/6PGD定量比值法的不足, MMCA法有明显的优势。分析G6PD/6PGD定量比值法对女性检测的灵敏度极低的原因, 女性患者中杂合子占90%(27/30), G6PD酶活性均正常, 所以G6PD/6PGD定量比值法不能筛出这部分杂合子。文献报道[4], 这些杂合子自身有发病风险, 在吃蚕豆或服用氧化性药物等一些诱因下也会发病。因此需要筛查出这部分女性杂合子, 为其提供预防措施。MMCA法灵敏度高, 能明显提高女性杂合子的检出率。虽然MMCA检测男性有12例出现假阴性, 其中11例是c.1311C>T突变, 氨基酸没有改变是同义突变, 另外1例是内含子上发生突变, 均不会导致G6PD酶活性改变, 所以MMCA法可以满足重庆地区临床需要, 准确快速诊断G6PD缺乏症。综上所述, MMCA法检测重庆地区的G6PD基因突变结果, 显示了常见的突变位点及频率; 其中最常见突变位点是c.1388G>A, 而中国其他G6PD缺乏症高发地区最常见的突变类型是1376G>T[13], 可见突变频率出现地域差异, 为G6PD缺乏症的预防、诊断和治疗提供可靠的流行病学依据。

为了了解重庆地区女性杂合子比例, 我们随机筛查1 754例女性的G6PD基因, 检测出高达1.14%的女性杂合子, 再检测它的G6PD酶活性均正常。如果用传统的方案先筛G6PD酶活性, 会漏检这部分杂合子患者。因而针对女性患者, 我们提出新的G6PD缺乏症诊断方案:所有女性标本先用MMCA方法筛查G6PD基因, 阳性患者再用G6PD/6PGD定量比值法检测G6PD酶活性。这样可以明显提高女性杂合子的检出率, 为杂合子孕妇遗传咨询提供遗传依据。

综上所述, 本研究利用MMCA法对女性进行基因筛查, 显示了它在杂合子筛查上的优势:与传统的定量比值法比较, MMCA法的灵敏度和特异性都高, 进而提出了一种快速、准确和适用于临床的G6PD缺乏症杂合子诊断新方案。

参考文献
[1] BEUTLER E. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency:a historical perspective[J]. Blood, 2008, 111(1): 16–24. DOI:10.1182/blood-2007-04-077412
[2] 袁义, 陈玲. 新生儿G6PD缺乏症并发高胆红素血症的临床分析[J]. 临床急诊杂志, 2013, 14(10): 484–486.
YUAN Y, CHEN L. Clinical analysis of neonatal G6PD deficiency complicated with hyperbilirubinemia[J]. J Clin Emerg, 2013, 14(10): 484–486. DOI:10.13201/j.issn.1009-5918.2013.10.015
[3] 邓春红, 肖朝霞, 吴仲环. 新生儿高胆红素血症G6PD缺乏症筛查及临床意义[J]. 中国优生与遗传杂志, 2011, 19(9): 97–98.
DENG C H, XIAO C X, WU Z H. The G6PD screening and clinical significance for neonatal hyperbibirubinemia[J]. Chin J Birth Health Heredi, 2011, 19(9): 97–98. DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2011.09.060
[4] KAPLAN M, HAMMERMAN C. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency:a potential source of severe neonatal hyperbilirubinaemia and kernicterus[J]. Semin Neonatol, 2002, 7(2): 121–128. DOI:10.1053/siny.2002.0099
[5] 莫莉, 蒙元劲, 陶静, 等. G6PD/6PGD定量比值法检测新生儿女性杂合子的临床分析[J]. 中国优生与遗传杂志, 2008, 16(11): 81–82.
MO L, MENG Y J, TAO J, et al. Clinical analysis on G6PD/6PGD quantitative ratio testing female heterozygote[J]. Chin J Birth Health Heredi, 2008, 16(11): 81–82. DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2008.11.059
[6] ZAFFANELLO M, RUGOLOTTO S, ZAMBONI G, et al. Neonatal screening for glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency fails to detect heterozygote females[J]. Eur J Epidemiol, 2004, 19(3): 255–257. DOI:10.1023/b:ejep.0000020445.48298.3f
[7] TANG J, ZHOU X, LIU X, et al. External quality assessment program for detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in the Guangxi region[J]. Exp Ther Med, 2017, 14(3): 2021–2024. DOI:10.3892/etm.2017.4761
[8] 郝颖, 蒋妮萍, 徐晓昕, 等. 多色探针熔解曲线技术在β地中海贫血产前基因诊断中的应用[J]. 中华检验医学杂志, 2016, 39(3): 192–196.
HAO Y, JANG N P, XU X X, et al. The application of multicolor probe melting curve analysis for the prenatal diagnosis of βthalassemia[J]. Chin J Lab Med, 2016, 39(3): 192–196. DOI:10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.03.010
[9] 严提珍, 钟青燕, 唐宁, 等. 多色探针荧光PCR熔解曲线法在G6PD基因突变检测中的临床应用评价[J]. 中华医学遗传学杂志, 2014, 31(2): 156–162.
YAN T Z, ZHONG Q Y, TANG N, et al. Clinical evaluation of a melting curve analysis-based PCR assay for glucose phosphate dehydrogenase gene mutation detection[J]. Chin J Med Genet, 2014, 31(2): 156–162. DOI:10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2014.02.007
[10] 张娟, 余朝文, 苗静琨, 等. 基于测序分析的新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症分子诊断与基因新突变鉴定[J]. 中华检验医学杂志, 2016, 39(11): 843–847.
ZHANG J, YU C W, MIAO J K, et al. Molecular diagnosis and mutation identification in newborn with glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency by DNA sequencing[J]. Chin J Lab Med, 2016, 39(11): 843–847. DOI:10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.11.011
[11] MIAO J K, CHEN Q X, BAO L M, et al. Determination of optimal cutoff value to accurately identify glucose-6-phosphate dehydrogenase-deficient heterozygous female neonates[J]. Clin Chim Acta, 2013, 424: 131–135. DOI:10.1016/j.cca.2013.05.004
[12] CAPPELLINI M, FIORELLI G. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency[J]. Lancet, 2008, 371(9606): 64–74. DOI:10.1016/s0140-6736(08)60073-2
[13] PENG Q, LI S, MA K, et al. Large cohort screening of G6PD deficiency and the mutational spectrum in the Dongguan District in Southern China[J]. PLoS ONE, 2015, 10(3): e0120683. DOI:10.1371/journal.pone.0120683
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201710014
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

文章信息

胡韦维, 李进, 刘益, 刘之岱, 张娟, 余朝文, 邹琳, 张鹏辉.
HU Weiwei, LI Jin, LIU Yi, LIU Zhidai, ZHANG Juan, YU Chaowen, ZOU Lin, ZHANG Penghui.
应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变
Detection of gene mutation in heterozygous of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency by multicolor melting curve analysis
第三军医大学学报, 2018, 40(9): 830-835
Journal of Third Military Medical University, 2018, 40(9): 830-835
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201710014

文章历史

收稿: 2017-10-09
修回: 2018-02-02

相关文章

工作空间