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Mibefradil通过下调FoxO1表达改善HepG2细胞的胰岛素抵抗
马欢1, 严军2, 张克斌3, 徐梓辉4     
1. 400037 重庆, 第三军医大学新桥医院: 内分泌科;
2. 400042 重庆, 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室, 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
3. 400037 重庆, 第三军医大学新桥医院: 中心实验室;
4. 400037 重庆, 第三军医大学新桥医院: 中西医结合科
[摘要] 目的 探索Mibefradil在体外对胰岛素抵抗HepG2细胞的作用。方法 将HepG2细胞分为对照组、棕榈酸盐(Palmitate,PA)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型组、药物溶剂(DMSO)组、低剂量(0.025 μmol/L)Mibefradil组、高剂量(0.05 μmol/L)Mibefradil组,通过检测各组糖原合成及葡萄糖消耗,观察Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的改善作用。用qRT-PCR、Western blot检测各组FoxO1,糖异生、糖原分解限速酶,即:磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase)的mRNA、蛋白相对表达量,明确转录因子FoxO1及其靶基因的表达水平。结果 相比于对照组,HepG2细胞胰岛素抵抗模型组的糖原合成量[(3.28±0.74) μg/μL vs(9.14±0.33) μg/μL,P < 0.01]及葡萄糖消耗量[(1.31±0.49) nmol/μg vs(5.87±2.26) nmol/μg,P < 0.01]明显下降;经Mibefradil干预后,胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成及葡萄糖消耗得到明显改善,且高剂量组的糖原合成[(7.09±0.60) μg/μL vs(5.73±0.16) μg/μL,P < 0.01)]及葡萄糖消耗[(6.45±0.02) nmol/μg vs(5.61±0.29) nmol/μg,P < 0.01]显著高于低剂量组,表明Mibefradil可改善HepG2细胞的胰岛素抵抗。qRT-PCR及Western blot检测结果表明,胰岛素抵抗HepG2细胞的FoxO1、PEPCK、G6Pase的表达量均显著增加(P < 0.01);经Mibefradil干预后,其表达量呈剂量依赖性下降(P < 0.05)。结论 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞具有改善作用,此作用可能与下调FoxO1的表达有关。
[关键词] Mibefradil     胰岛素抵抗     HepG2细胞     FoxO1    
Mibefradil improves insulin-resistance HepG2 cells by down-regulating FoxO1 expression
MA Huan1 , YAN Jun2 , ZHANG Kebin3 , XU Zihui4     
1. Department of Endocrinology, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400037;
2. State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Department 1, Institute of Surgery Research, Daping Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400042, China;
3. Laboratory Center, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400037;
4. Department of Integrated Chinese and Western Medicine, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400037
Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China (81570781)
Corresponding author: XU Zihui, E-mail: zihuixu@yeah.net
[Abstract] Objective To explore the ameliorative effect of Mibefradil on the insulin resistance model of HepG2 cells in vitro. Methods HepG2 cells were randomly divided into 5 groups, that is, control group, insulin resistance model group (induced by 0.25 mmol/L palmitate), DMSO model group, low-dosage Mibefradil treatment group (0.025 μmol/L), and high-dosage Mibefradil treatment group (0.05 μmol/L). And all groups were disposed with corresponding drugs according to the above mentioned for 24 h. Glycogen synthesis and glucose consumption of HepG2 cells of each group were detected to observe treatment effects of Mibefradil. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and Western blotting were used to detect the expression levels of FoxO1 and limited enzymes of gluconeogenesis and glycogenolysis, that is, phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK) and glucose-6-phosphatase (G6Pase), which are the target genes of FoxO1. Results Compared with control group, the model group had significantly decreased glycogen synthesis (3.28± 0.74 vs 9.14±0.33 μg/μL, P < 0.01) and glucose consumption (1.31±0.49 vs 5.87±2.26 nmol/μg, P < 0.01). Mibefradil treatment obviously improved glycogen synthesis and glucose consumption in the HepG2 cells of insulin resistance model, with the high-dosage Mibefradil group more significant than the low-dosage one (7.09±0.60 vs 5.73±0.16 μg/μL, P < 0.01; 6.45±0.02 vs 5.61±0.29 nmol/μg, P < 0.01). qRT-PCR and Western blotting indicated that the expression levels of FoxO1, PEPCK and G6Pase were remarkably increased in the HepG2 cells of insulin resistance model, however Mibefradil treatment would decrease the levels in a dose-dependent manner (P < 0.05). Conclusion Mibefradil relieves the insulin resistance of HepG2 cells via decreasing the expression of FoxO1.
[Key words] Mibefradil     insulin resistance     HepG2 cells     FoxO1    

Mibefradil,作为一种钙离子拮抗剂,兼具有T型钙通道和L型钙通道抑制作用,只是对T型钙通道的选择性比对L型钙通道高30-50倍,往往被作为T型钙通道拮抗剂[1]。T型电压门控钙通道与L型电压门控钙通道不同,其具有低电压、失活速度快、单通道电导小的特点,是唯一的低电压依赖性钙通道,由1G (Cav3.1)、1H(Cav3.2)、1I(Cav3.3) 等3种亚单位组成[2]。1G(Cav3.1)、1H(Cav3.2) 在心肌、神经元、血管平滑肌细胞和内分泌腺体细胞、肝脏等广泛分布,1I(Cav3.3) 只在神经细胞中表达[3]。研究发现[4],钙离子拮抗剂Mibefradil在显著改善糖尿病db/db小鼠高胰岛素血症的同时降低了高血糖,而对正常小鼠血糖无明显影响,但其具体降糖机制不明。

本实验以人的肝胚胎瘤细胞——HepG2细胞作为研究对象,用0.25 mmol/L的棕榈酸盐(palmitate,PA)诱导HepG2细胞成为胰岛素抵抗模型[5-6],初步探索Mibefradil对FoxO1的影响及Mibefradil改善胰岛素抵抗、降低血糖的机制。

1 材料与方法 1.1 实验试剂与器材

HepG2细胞购自中科院上海细胞库,高糖DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶(Hyclone,美国),胎牛血清(四季青,中国浙江天杭生物科技有限公司),脱脂胎牛血清白蛋白、棕榈酸盐(Solarbio,北京索莱宝生物科技有限公司),Mibefradil(Sigma-Aldrich,美国)溶解于DMSO中保存,糖原检测试剂盒(Biovision,美国),总RNA提取试剂盒RNAiso Plus、Prime ScriptTM RT reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ(TaKaRa,日本),FoxO1、G6PasePEPCK引物序列由Invitrogen设计、合成,序列见表 1。葡萄糖检测试盒、抗PEPCK兔多克隆抗体(Abcam,美国),抗FoxO1兔多克隆抗体(CST,美国),抗G6Pase鼠单克隆抗体(Santa Cruz,美国),抗β-actin兔多克隆抗体(Proteintech,美国),辣根过氧化物酶标记山羊抗鼠IgM二抗(武汉博士德生物技术有限公司),辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司),ECL化学发光显影剂(Thermo,美国)。

表 1 FoxO1、PEPCKG6Paseβ-actin基因qRT-PCR引物序列
目的基因上游引物序列上游引物序列扩增片段(bp)
FoxO15′-TCGTCATAATCTGTCCCTACACA-3′5′-CGGCTTCGGCTCTTAGCAAA-3′168
PEPCK5′-GCAAGACGGTTATCGTCACCC-3′5′-GGCATTGAACGCTTTCTCAAAAT-3′116
G6Pase5′-GTGTCCGTGATCGCAGACC-3′5′-GACGAGGTTGAGCCAGTCTC-3′126
β-actin5′-GTGAAGGTGACAGCAGTCGGTT-3′5′-GAAGTGGGGTGGCTTTTAGGAT-3′157

1.2 实验方法

1.2.1 HepG2细胞的培养及分组

复苏在液氮罐中冻存的HepG2细胞,置于含10%胎牛血清,1%青-链霉素的高糖DMEM培养基中,于37 ℃,5%CO2的恒温箱进行培养,当细胞贴壁生长融合至70%~80%时用0.25%胰酶进行消化、传代并分组(n=3):① 对照组:正常无血清高糖DMEM培养基;② 棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组:在正常无血清高糖DMEM培养基基础上,加入棕榈酸盐,使棕榈酸盐终浓度为0.25 mmol/L;③ 药物溶剂组:在棕榈酸盐诱导HepG2细胞成为胰岛素抵抗模型的基础上,同时加入DMSO,保证DMSO的体积分数小于0.1%;④ 低剂量Mibefradil组:在棕榈酸盐诱导HepG2细胞成为胰岛素抵抗模型的基础上,同时加入Mibefradil,使Mibefradil终浓度为0.025 μmol/L;⑤ 高剂量Mibefradil组:在棕榈酸盐诱导HepG2细胞成为胰岛素抵抗模型的基础上,同时加入Mibefradil,使Mibefradil终浓度为0.05 μmol/L;于37 ℃,5%CO2的恒温箱中培养24 h。

1.2.2 棕榈酸盐溶液的配制

称取16.704 6 mg的棕榈酸盐于5 mL EP管中,加入1 mL超纯水,在70 ℃水浴中均匀摇动,使其完全溶解至溶液变澄清,制备成60 mmol/L的棕榈酸盐溶液。同时配制10%脱脂胎牛血清白蛋白溶液,55 ℃水浴助溶。将上述配制好的溶液按比例混合,制备成浓度为6 mmol/L的棕榈酸盐溶液,55 ℃水浴助溶。冷却至室温后,过滤除菌,-20 ℃保存。用前55 ℃水浴15 min使其溶解,然后冷却至室温后使用。

1.2.3 糖原合成检测

按1.2.1步骤中的操作方法处理细胞,24 h后各组细胞用0.25%胰酶消化,再用等体积高糖DMEM培养基中和,移入10 mL离心管中离心(4 ℃,200×g,5 min),用1×PBS缓冲液洗2次,最后一次用1×PBS缓冲液重悬后对各组细胞进行计数,再次离心(4 ℃,200×g,5 min)后,尽量吸净PBS,加入预冷的Glycogen Hydrolysis Buffer裂解细胞10 min。按照试剂盒说明书配制标准曲线,加入反应物,每组3个复孔,在37 ℃孵箱中孵育30 min,最后用酶标仪测量450 nm处的吸光度值,运用标准曲线得到样品的糖原含量。

1.2.4 葡萄糖消耗检测

5组细胞加药处理24 h后,用无酶枪头吸取各组培养基1 mL,分别装在5个无菌无酶的EP管中,4 ℃条件下,200×g离心5 min。每组培养基样品3个副孔,每个副孔体积为1 μL,并用Glucose Assay Buffer调平至50 μL。按照试剂说明书配制标准曲线,并加入反应物,在37 ℃孵箱中避光孵育30 min,用酶标仪检测579 nm处的吸光度值,通过标准曲线计算样品的葡萄糖浓度,并用高糖DMEM培养基葡萄糖浓度减去测得样品的葡萄糖浓度即为葡萄糖消耗浓度。与此同时,用Western及IP细胞裂解液裂解每组细胞,然后参照碧云天BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书对细胞蛋白浓度进行测定。

1.2.5 细胞内糖原染色

在六孔板中放入爬片后,将HepG2细胞胺2×104/mL接种于6孔板内,正常培养基补足溶液体积为3 mL,待细胞长至50%~70%,分组培养细胞,于37 ℃,5%CO2的恒温箱中培养24 h。在相应时间点,从培养箱中取出六孔板,用1×PBS缓冲液洗2次,再用Carnoy固定液(由纯乙醇、冰醋酸、氯仿按体积比6:1:3制成)固定细胞30 min,用1×PBS缓冲液清洗3次,每次10 min。之后按照碘酸雪夫染色法(PAS法)对细胞进行染色。

1.2.6 qRT-PCR检测FoxO1、G6Pase、PEPCK基因相对表达

将细胞传至六孔板中,待细胞融合面积为80%~90%后,按1.2.1中的分组加药处理24 h,在相应时间点,根据TRIzol提取RNA的方法依次加入氯仿、异丙醇、75%乙醇提取RNA,测D值确定RNA浓度,D(260)/D(280) 在1.8~2.2。然后根据TaKaRa公司的Prime ScriptTM RT reagent Kit With gDNA Eraser说明书要求,以总RNA为模板先去除基因组DNA,再逆转录为cDNA片段。最后以cDNA为模板,分别加入FoxO1、PEPCKG6Paseβ-actin的特异性引物(序列见表 1),按照试剂盒说明书操作方法进行扩增。用2-△△Ct法计算相对表达量。所有实验重复3次。

1.2.7 Western blot检测FoxO1、G6Pase、PEPCK蛋白表达水平

将HepG2细胞按照1.2.1中的分组进行处理后,用Western blot检测FoxO1、G6Pase、PEPCK蛋白表达水平。将收集的细胞样本依次提取蛋白、上样、电泳、转膜,以含5%脱脂奶粉的TBST室温封闭1~2 h,一抗采用抗PEPCK兔多克隆抗体,抗FoxO1兔多克隆抗体,抗G6Pase鼠单克隆抗体,抗β-actin兔多克隆抗体,于4 ℃孵育过夜,二抗37 ℃ 2 h,ECL显影。用Image J软件对各个条带的灰度值进行半定量分析。

1.3 统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件,计量资料以x± s表示,进行单因素方差分析。

2 结果 2.1 HepG2细胞的体外培养

在倒置显微镜下观察HepG2细胞形态,HepG2细胞贴壁生长,形态呈梭形(图 1A)。加入棕榈酸盐诱导成为胰岛素抵抗模型后,部分细胞变圆、折光性增强(图 1B)。加入Mibefradil干预后的细胞形态学变化与棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组一致(图 1C),表明棕榈酸盐对HepG2细胞有损伤作用,Mibefradil不能逆转这种损伤。

A:对照组;B:棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组;C:低剂量Mibefradil干预的胰岛素抵抗模型组↑:示HepG2细胞 图 1 倒置显微镜观察HepG2细胞形态变化

2.2 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞糖原合成及葡萄糖消耗的影响

与对照组相比,模型组与药物溶剂组的细胞糖原含量及葡萄糖消耗明显降低(P < 0.01);经Mibefradil干预后,细胞内糖原含量、葡萄糖消耗较模型组明显增加(P < 0.01),且高剂量组的糖原合成量、葡萄糖消耗明显高于低剂量组(P < 0.01)。结果见表 2。用碘酸雪夫染色法(PAS法)对细胞进行染色后,在倒置显微镜下观察细胞内糖原染色情况,如图 2所示。与对照组比较,棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组HepG2细胞内糖原染色变浅,表明糖原合成减少。经Mibefradil干预后,HepG2细胞内糖原染色加深,表明细胞内糖原合成增加。

A:正常对照组;B:棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组;C:低剂量Mibefradil干预的胰岛素抵抗模型组 图 2 PAS染色倒置显微镜观察Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞糖原合成的影响

表 2 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞糖原合成葡萄糖消耗的影响(n=3,x± s)
组别细胞糖原合成(μg/μL)d细胞葡萄糖消耗(nmol/μg)e
对照组9.14±0.335.87±2.26
棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组3.28±0.74a1.31±0.49a
药物溶剂组2.77±0.98a1.53±0.73a
低剂量Mibefradil组5.73±0.16b5.61±0.29b
高剂量Mibefradil组7.09±0.60bc6.45±0.02bc
a:P < 0.01,与对照组比较;b:P < 0.05,与棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组比较;c:P < 0.05,与低剂量Mibefradil组比较;d:各组细胞经计数板计数后,达到106个数量级;e:各组细胞用Western及IP细胞裂解液充分裂解后,用BCA法检测各组细胞的蛋白浓度,用于调平各组的葡萄糖消耗量

2.3 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的FoxO1、G6PasePEPCK基因表达的影响

在棕榈酸盐诱导下的HepG2细胞的FoxO1、G6PasePEPCK基因相对表达量较对照组明显增加(P < 0.01);Mibefradil干预后,FoxO1、G6PasePEPCK基因相对表达量较模型组及药物溶剂组明显下降(P < 0.01),且高剂量组与低剂量组之间的基因相对表达量也有统计学差异(P < 0.05)。结果见表 3

表 3 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞FoxO1、G6PasePEPCK基因相对表达量(2-△△Ct)的影响(n=3,x± s)
对照组1.00±0.001.00±0.001.00±0.00
棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组3.54±0.46a5.73±1.75a3.54±0.48a
药物溶剂组3.71±0.555.33±1.264.69±0.88
低剂量Mibefradil组2.07±0.42b2.63±0.05b3.24±1.14b
高剂量Mibefradil组1.19±0.30c2.44±0.32c1.61±1.33c
a:P < 0.01,与对照组比较;b:P < 0.05,与棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组比较;c:P < 0.05,与低剂量Mibefradil组比较

2.4 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的FoxO1、G6Pase、PEPCK蛋白表达量的影响

经棕榈酸盐诱导后,HepG2细胞的FoxO1、G6Pase、PEPCK蛋白表达量较对照组增加;Mibefradil干预后,FoxO1、G6Pase、PEPCK蛋白表达量较模型组及药物溶剂组明显下降,且高剂量组与低剂量Mibefradil组的蛋白表达量呈剂量依赖性下降。结果见图 3表 4

1:对照组;2:棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组;3:药物溶剂组;4:低剂量Mibefradil组;5:高剂量Mibefradil组 图 3 Western Blot检测Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的FoxO1(A)、G6Pase、PEPCK(B)蛋白表达的影响

表 4 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞FoxO1、G6Pase、PEPCK蛋白表达量的影响(n=3,x± s)
组别FoxO1G6PasePEPCK
对照组0.67±0.070.14±0.040.73±0.02
棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组0.80±0.05a0.20±0.01a0.97±0.04a
药物溶剂组0.75±0.060.18±0.010.89±0.03
低剂量Mibefradil组0.55±0.03b0.12±0.01b0.76±0.03b
高剂量Mibefradil组0.35±0.01c0.07±0.02d0.30±0.01c
a:P < 0.01,与对照组比较;b:P < 0.05,与棕榈酸盐诱导的胰岛素抵抗模型组比较;c:P < 0.01,d:P < 0.05,与低剂量Mibefradil组比较

3 讨论

高血糖(hyperglycemia)和胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是2型糖尿病的两大主要特征,其中IR是由于胰岛素绝对和(或)相对不足,导致各胰岛素的靶器官(如:肝脏、骨骼肌)利用葡萄糖的能力下降。生理条件下,肝脏在机体血糖调节过程中发挥枢纽的角色。一方面,在饥饿状态或延长空腹的情况下,肝脏通过糖异生、糖原分解以提供机体所需的葡萄糖;另一方面,在进食后,机体胰岛素分泌量增加,肝脏通过糖原合成、糖酵解以调控血糖的储存和摄取[7],从而维持餐后血糖水平。然而,2型糖尿病模型所共有的特征是肝脏的葡萄糖输出增加,表现为糖异生、糖原分解过程亢进,糖原合成、糖酵解相对缓慢。有研究[8]表明,这是由于与此过程相关的限速酶基因,即:磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase)的表达上调所致。

肝脏是维持血糖稳态的重要器官,而内源性转录因子-FoxO1蛋白在肝脏调节血糖过程中发挥重要的角色。FoxO1蛋白属于forkhead/winged ɑ-螺旋转录因子O家族(FoxO)中的一员,是第一个被鉴定为胰岛素信号传递过程中Akt的底物[9]。FoxO1蛋白有3个Akt磷酸化位点,即:苏氨酸24位点(T24)、丝氨酸256位点(S256) 与丝氨酸319位点(S319)。在进食状态下,胰岛素信号通路被激活,Akt调节FoxO1蛋白分子中3个保守的氨基酸位点(T24、S256、S319) 发生磷酸化,导致FoxO1蛋白与14-3-3结合并发生核外排,继而肝脏糖原分解、糖异生被抑制;相反地,在空腹状态下,FoxO1蛋白活化并始终定位于细胞核,并与其DNA结合位点上的胰岛素反应元件(insulin response element,IRE:CAAAACAA)相互作用,导致G6PasePEPCK基因的转录,并增加葡萄糖的合成[10-11]。当机体发生糖尿病时,Akt失活,FoxO1主要以活化的形式存在于细胞核内,导致肝脏葡萄糖输出增加,因此诱导糖尿病的发生、进展。已有研究发现,敲除或干扰肝脏中的FoxO1后,能显著降低2型糖尿病小鼠的血糖水平,改善其胰岛素抵抗[12-14],表明FoxO1与肝脏的葡萄糖输出紧密联系。而Mibefradil能否阻止FoxO1蛋白核转位或者降低FoxO1的表达,从而抑制肝脏糖代谢紊乱至今仍不清楚。

研究表明T型钙通道通过增强全细胞兴奋性有利于大鼠胰岛素瘤细胞株INS-1细胞胰岛素释放[15],Mibefradil可通过下调胰岛细胞T型钙通道Cav3.1、Cav3.2亚基表达抑制高糖作用下INS-1细胞胰岛素分泌[16]。本研究发现,Mibefradil增加棕榈酸盐诱导的HepG2细胞糖原的合成及葡萄糖消耗,改善其胰岛素抵抗。进一步我们发现Mibefradil降低FoxO1基因及其靶基因G6PasePEPCK的表达,因此我们大胆推测Mibefradil通过FoxO1-G6PasePEPCK通路发挥作用,最终减少肝细胞葡萄糖的输出,这与我们前期体内实验发现Mibefradil能显著改善糖尿病db/db小鼠高胰岛素血症、降低高血糖的结论一致[4]

糖尿病模型的胰腺、肝脏、脑组织等存在细胞内钙离子紊乱,说明糖尿病血糖升高可能与胞内钙离子紊乱有关[17],而胞内钙离子浓度升高可以激活钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Calmodulin dependent kinase Ⅱ,CaMKⅡ)。研究报道在空腹或肥胖情况下,肝糖输出增加与钙信号通路激发的CaMKⅡ的活性上升有关,CaMKⅡ的活性激活后可以增强转录因子FoxO1的核转位,从而加强肝糖的输出[18]。那么,Mibefradil是否能通过阻滞肝细胞钙离子缓慢内流,抑制CaMKⅡ的活性,阻止FoxO1核转位,从而抑制肝脏糖代谢紊乱至今仍不清楚。下一步,我们将针对CaMKⅡ-FoxO1通路探索Mibefradil的降糖机制,通过对此通路的深入研究以拓展我们对于糖尿病发病机制的了解,并可能为糖尿病的防治提供新的思路。

综上所述,Mibefradil能改善棕榈酸盐诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗,初步推测可能与降低FoxO1表达有关,但具体机制较复杂,仍须进一步探索其改善胰岛素抵抗的分子机制。

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http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201705074
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

文章信息

马欢, 严军, 张克斌, 徐梓辉.
MA Huan, YAN Jun, ZHANG Kebin, XU Zihui.
Mibefradil通过下调FoxO1表达改善HepG2细胞的胰岛素抵抗
Mibefradil improves insulin-resistance HepG2 cells by down-regulating FoxO1 expression
第三军医大学学报, 2017, 39(20): 1973-1979
Journal of Third Military Medical University, 2017, 39(20): 1973-1979
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201705074

文章历史

收稿: 2017-06-01
修回: 2017-07-18

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