糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种以血液中的葡萄糖(简称血糖)水平增高为主要特征的全身慢性代谢性疾病，已成为世界性公共健康卫生问题之一。西医药在治疗糖尿病中会出现继发性失效、副作用大及对慢性并发症防治不足的缺点；中医药治疗糖尿病受到越来越多的关注，但现有中药普遍存在降糖效果不佳的缺点。因此，开发安全高效的治疗糖尿病中药制剂，一直是中医药工作者研究的热点。糖尿病在我国中医学里被归为“消渴症”范畴。《本草纲目》里记载了多种具有降血糖功效的中草药，如三七和石斛。七斛血糖制剂是以三七、石斛、山药、葛根为主要成分的十几种纯中药复方制剂，具有生津清热、滋阴养肾的功效，符合中医治疗“消渴症”的原则。为明确其治疗2型糖尿病的药理作用，本实验选用KK-A^y自发性2型糖尿病小鼠^[1]为疾病模型，开展七斛血糖制剂的药效学研究，以期为七斛血糖制剂的临床开发应用提供参考。

1 材料与方法 1.1 实验动物

雌性6~7周龄SPF级C57BL/6小鼠10只，体质量18~20 g，雌性6~7周龄SPF级KK-A^y小鼠50只，体质量28~30 g，均购于北京华阜康生物科技股份有限公司[生产许可证号：SCXK(京)2012-0001]。

1.2 药品、试剂及仪器

实验所用受试药品七斛血糖制剂由重庆七斛生物制药有限责任公司提供。该药品是将三七、石斛、山药、葛根等十几种纯中药按照一定配比打粉后，置于SBH-200系类三维混合机混合30 min，采用摇摆制粒机(YK-160型)制粒，将制好的湿粒置于TX-881-0型热风循环干燥箱内，在(55±2)℃条件下恒温干燥4.5~5 h，干燥至物料水分含量≤10%。将干燥好的颗粒置于ZS-350振动筛快速整粒后过18目筛即得七斛血糖制剂。阳性对照药：盐酸二甲双胍，上海施贵宝公司(批号：AAH5846)。羧甲基纤维素钠，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。稳豪倍优血糖仪和稳豪型血糖试纸，强生(中国)医疗器材有限公司生产(批号：3939896)。

1.3 方法

实验开始前动物适应性喂养1周，将10只C57BL/6小鼠作为正常对照组，将50只随机血糖值达到糖尿病诊断标准(即≥11.1 mmol/L)的KK-A^y小鼠随机分成5组，每组10只：模型对照组(助溶剂0.3%羧甲基纤维素钠CMCNa)，七斛血糖制剂低、中、高剂量组(0.75、1.5、3.0 g/kg)，阳性对照组(二甲双胍，0.13 g/kg)。以上各组均灌胃给药28 d，2次/d，给药体积为0.03 mL/g，正常对照组和模型对照组给予等体积0.3% CMCNa。C57BL/6小鼠给予生长维持颗粒饲料，KK-A^y小鼠给予高脂饲料(含10%猪油、10%蛋黄粉和10%葡萄糖，为KK-A^y小鼠专用高能量饲料)。12 h昼夜更替饲养。

1.4 观察指标

1.4.1 一般情况

实验期间，观察记录各组小鼠的活动状态、毛色、精神状态、饮食、排尿排便及死亡情况，随时监测血糖情况。

1.4.2 摄食量和体质量测定

给药1周后，每周连续3 d进行摄食量检测，计算每只动物的平均摄食量。分别于给药第8、15、22、29天测量体质量，计算各组平均体质量增长值。

1.4.3 血糖测定

分别于给药第8、15、22、29天灌胃给药前取尾静脉血测定小鼠随机血糖值，计算各组平均血糖值和降糖率。

1.4.4 总胆固醇和甘油三酯测定以及HE染色观察肝脏、胰腺的病理学改变

各组动物于给药第29天后处死，眼眶取血，分离血清，采用全自动生化分析仪测定血清中总胆固醇和甘油三酯的含量。分别取一部分肝脏和胰腺组织固定于4%多聚甲醛，石蜡包埋，用于苏木精-伊红染色(HE染色)制备病理切片。

1.5 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件，计量资料以x±s表示，各组间样本差异的比较采用单因素方差分析。

2 结果 2.1 小鼠一般情况

KK-A^y小鼠随机血糖值达到糖尿病诊断标准后，出现糖尿病典型的三多行为，既多饮、多食、多尿。小鼠毛发光泽度降低、竖毛、嗜睡、少动。实验期间无动物死亡。

2.2 小鼠摄食量变化

各组小鼠第15、22、29天的摄食量见表 1，与正常对照组相比，模型对照组小鼠的摄食量显著增加(P＜0.01)。与模型对照组小鼠相比，七斛血糖制剂低、中、高剂量组和二甲双胍组小鼠的摄食量均显著降低(P＜0.05)，其中第29天时，七斛血糖制剂中剂量组的摄食量只有(4.07±0.04) g，差异有统计学意义(P＜0.01)，但与二甲双胍组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.3 小鼠体质量变化

与正常对照组比较，模型对照组的体质量在整个实验期间均显著增高(P＜0.01，表 2)。与模型对照组相比，七斛血糖制剂低、中、高剂量组体质量从第15天开始均显著降低(P＜0.05)，其中第29天时，七斛血糖制剂高剂量组的体质量只有(32.14±9.35) g，差异有统计学意义(P＜0.01)，但与二甲双胍组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 小鼠随机血糖和降糖率

由图 1可见，正常对照组的随机血糖值一直在正常范围内；与正常对照组相比，模型对照组小鼠随机血糖值显著升高(P＜0.01)；与模型对照组小鼠相比，七斛血糖制剂低、中、高剂量组均表现出了较好的降糖效果；给药第15天，七斛血糖制剂低、中剂量组的随机血糖值显著降低(P＜0.05)；给药第29天，七斛血糖制剂低、中、高剂量组随机血糖值显著降低(P＜0.05，P＜0.01)，中、高剂量七斛血糖制剂与二甲双胍的降糖水平差异无统计学意义(P＞0.05)。由表 3可见，给药第29天，七斛血糖制剂低、中、高剂量组降糖率表现出一定的量效关系，二甲双胍组的降糖率为34.77%。以上结果说明七斛血糖制剂和二甲双胍均能有效控制KK-A^y小鼠血糖水平的持续升高。

2.5 小鼠总胆固醇和甘油三酯水平

各组小鼠血清中总胆固醇和甘油三酯检测结果见表 4。与正常对照组比较，模型对照组总胆固醇和甘油三酯均显著增高(P＜0.01)；与模型对照组相比，七斛血糖制剂低、中、高剂量组的总胆固醇均有所降低，但差异无统计学意义(P＞0.05)。与模型对照组相比，七斛血糖制剂低、中、高剂量组甘油三酯值均有降低趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.6 七斛血糖制剂对糖尿病模型小鼠肝脏的病理学改变的影响

正常对照组小鼠肝脏细胞排列致密，无肿胀和脂肪变性，病理分级为0级；模型对照组小鼠肝细胞索状结构消失，肝细胞肿胀，发生脂肪变性，能观察到明显的脂肪沉积，病理分级为3级。七斛血糖制剂低剂量组小鼠肝细胞肿胀和脂肪变性程度减轻，病理分级为2级。七斛血糖制剂中、高剂量组以及二甲双胍组小鼠肝细胞肿胀和脂肪变性程度明显减轻，病理分级为1级(图 2)。

2.7 七斛血糖制剂对糖尿病模型小鼠胰腺的病理学改变的影响

正常对照组胰腺结构清晰，边界清晰，胰岛细胞排列整齐，分布均匀，岛内细胞较多，病理分级为0级；模型对照组胰岛严重萎缩，岛内细胞数减少，病理分级为3级；与模型对照组比较，七斛血糖制剂低剂量组胰岛萎缩程度减轻，岛内细胞数增加，病理分级为2级。七斛血糖制剂中、高剂量组以及二甲双胍组胰岛萎缩程度明显减轻，岛内细胞数均明显增加，病理分级为1级(图 2)。

3 讨论

糖尿病已成为世界性公共健康卫生问题之一，全球糖尿病的患病率正以惊人的速度急剧上升，我国糖尿病的发病率也在逐年上升^[2]。治疗糖尿病的关键就是控制血糖的增长，改善并发症。糖尿病在我国中医里属于“消渴症”范畴，中医药治疗糖尿病历史悠久，早在2000年以前就有记载^[3]。中医认为该病是由于阴虚燥热所致，阴虚为本，燥热为标，二者互为因果^[4]。中医药因其纯天然特性以及温和持久的疗效，尤其在预防和控制糖尿病慢性并发症^[5]、提高患者生存质量方面具有很大的优势。越来越多的医学家专注于中医药治疗糖尿病的研究。近年来，大量文献报道了各种中医药治疗糖尿病的成果^[6]。钱秋海等^[7]认为糖尿病的基本病理机制为脾肾两虚、痰瘀阻络、肝失调达，因此，以固本调肝、活血化痰为依据，研制出含有三七、黄芪等多种中医药的三黄消渴胶囊，能显著降低血糖水平，提高胰岛素敏感指数，降低胰岛素抵抗指数。

本研究中的七斛血糖制剂是由十几种具有一定降糖作用的中药组成，根据中医辨证加减配比制成的复方制剂，主要成分是三七、石斛、山药、葛根。据《本草纲目新编》记载：三七根，止血之神药也。无论上、中、下之血，凡有外越者，一味独用亦效，加入于补气补血药中则更神。盖此药得补而无沸腾之患，补红得此而有安静之休也。三七具有活血化瘀、滋补强壮、降血脂、降血糖、提高机体免疫功能等作用^[8-10]。石斛，气味：甘、平、无毒；主治：伤中，除痹下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，权壮筋骨，暖水脏，益智清气。可见石斛具有滋阴补虚、清热、生津益胃、润肺止咳、明目强壮^[11]、抗衰老、抗氧化、降血糖、提高机体免疫力的作用。山药治诸虚百损，益肾气，健脾胃，除烦热，补心气不足，可治消渴、虚劳喘逆，补肾强身。葛根具有解肌退热、生津止渴、升阳止泻之功效，可用于热病口渴、阴虚消渴、脾虚泄泻。

本研究发现七斛血糖制剂能显著降低KK-A^y糖尿病小鼠血糖水平，其中七斛血糖制剂高剂量组的降糖效果与二甲双胍组的降糖效果相当。姚思宇等^[12]研究用三七泡茶对糖尿病小鼠血糖的影响，发现三七可以显著提高降糖率，与本研究的结果一致。长期血糖升高，可能造成大血管、微血管受损，危及心脏、肾脏等器官^[13]。同时，糖尿病患者通常伴有脂质代谢紊乱^[14]，易出现高血脂、脂肪肝、肝硬化等并发症，从而导致患者死于心脑血管并发症。而中药的优势在于减轻、延缓和预防各种并发症的发生。本研究结果显示七斛血糖制剂对KK-A^y小鼠总胆固醇和甘油三酯水平有一定改善作用，预示着七斛血糖制剂可降低糖尿病患者并发心血管疾病的风险，具体的作用机制还有待进一步研究。HE染色观察七斛血糖制剂对KK-A^y糖尿病小鼠肝脏、肾脏、血管、胰腺组织病理学改变的影响，结果显示七斛血糖制剂能够有效减轻肝细胞的肿胀和脂肪变性程度，减轻胰岛萎缩程度，增加岛内细胞数量；但未观察到各组间肾脏及血管的形态学差异，可能是KK-A^y小鼠发病期和生存期短，还未发展为肾脏和血管的病理学改变。施红等^[15]发现石斛具有显著的降低血糖、甘油三酯和胆固醇的作用，并能保护和修护胰岛组织结构，促进胰岛素分泌，增加外周组织对胰岛素的敏感性，与本研究结果一致。

本研究显示，七斛血糖制剂能够有效降低KK-A^y糖尿病小鼠血糖水平、摄食量，控制KK-A^y糖尿病小鼠体质量增长，对KK-A^y糖尿病小鼠血脂水平有一定的改善作用，并能降低KK-A^y糖尿病小鼠肝脏和胰腺病理学改变程度，具有潜在的临床应用价值。该中药复方制剂的降糖作用机制及其对糖尿病心血管并发症的具体作用及机制，值得深入研究。