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Sirt1通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞脂多糖损伤
刘俊彦, 吕学军, 赵维, 胡明冬, 李玉英, 王关嵩, 徐剑诚, 钱桂生     
400037 重庆,第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所,全军呼吸病研究重点实验室
[摘要] 目的 研究酵母沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin type 1, Sirt1) 在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)脂多糖(LPS)损伤中对NF-κB的作用。方法 购买Sirt1过表达(Tg)小鼠和野生型(WT)小鼠,饲养、繁殖、鉴定新生小鼠基因型; 通过qRT-PCR和Western blot鉴定Tg小鼠和WT小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白表达差异;两种不同Sirt1基因背景的小鼠LPS(15 mg/kg)腹腔注射12 h后,HE染色鉴定肺组织病理变化差异;分离纯化两种小鼠的AECⅡ并进行鉴定;两种不同Sirt1基因背景的AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后, 分别在0、2、4、6、8、12、24 h用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6) 和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的水平;用LPS 10 μg/mL处理两种AECⅡ,同时设置生理盐水对照组,12 h后用Western blot鉴定细胞NF-κB/p65蛋白和乙酰化NF-κB/p65蛋白的表达差异。结果 新生小鼠有Tg和WT两种不同的基因型;Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于WT小鼠(P<0.05);小鼠腹腔注射LPS 15 mg/kg 12 h后肺组织病理变化显示,Tg小鼠较WT小鼠肺组织损伤程度轻;两种AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后,细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平随时间推移呈现逐渐升高的趋势,Tg组AECⅡ细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平在多个时间点都显著低于WT组(P<0.05);两种AECⅡ经LPS(10 μg/mL)处理后,与各自的空白对照组相比Sirt1含量下降,且WT组AECⅡ下降更明显,LPS处理后WT组AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数均高于Tg组。结论 Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65参与调控AECⅡ LPS炎症损伤,抑制急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)小鼠肺部炎症反应。
[关键词] Sirt1     急性呼吸窘迫综合征     肺泡Ⅱ型上皮细胞     NF-κB    
Sirt1 protects against lipopolysaccharide-induced injury in mouse type Ⅱ alveolar epithelial cells by deacetylating RelA/p65 subunit of nuclear factor-κB
LIU Junyan , LYU Xuejun , ZHAO Wei , HU Mingdong , LI Yuying , WANG Guansong , XU Jiancheng , QIAN Guisheng     
Institute of Respiratory Diseases, Key Laboratory of Respiratory Diseases, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400037, China
Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China (81370167)
Corresponding author: LI Yuying, E-mail:zhlyyhy@163.com
[Abstract] Objective To determine whether nuclear factor-κB (NF-κB) are regulated by Sirtuin type 1(Sirt1) in mouse type Ⅱ alveolar epithelial cells (AECⅡs) following exposure to lipopolysaccharide (LPS). Methods Genetically modified mice with Sirt1 overexpression (Tg) and wild-type (WT) mice were bred and the genotypes of the offspring mice were identified. The expression levels of Sirt1 mRNA and protein in the lung tissues of Tg mice and WT mice were compared using qRT-PCR and Western blotting. Tg mice and WT mice were subjected to a single intraperitoneal injection of LPS (15 mg/kg), and 12 h later, the lung tissues of the mice were harvested for HE staining. AECⅡs were isolated and purified from both Tg mice and WT mice, and at 0, 2, 4, 6, 8, 12, and 24 h after LPS (10 μg/mL) exposure, the cells were examined for interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in the supernatant using ELISA. The AECⅡs from Tg and WT mice were challenged with LPS (10 μg/mL) or normal saline (control), and Western blotting was used to detect the expression of NF-κB/p65 and acetylized NF-κB/p65 in the cells 12 h after the treatment. Results In Tg mice, the expression levels of Sirt1 mRNA and protein in the lung tissue were significantly higher than those in WT mice (P < 0.05). At 12 h of after injection of LPS (15 mg/kg), Tg mice exhibited milder lung injuries than the WT mice. In AECⅡs from Tg and WT mice, LPS (10 g/mL) treatment resulted in significant and progressive increases in the expression levels of IL-6 and TNF-α as the treatment time extended, and at each time point of measurement, the levels of IL-6 and TNF-α were significantly lower in AECⅡs from Tg mice than in the cells from the WT mice (P < 0.05). LPS (10 μg/mL) treatment reduced the expression of Sirt1 in AECⅡs from both Tg and WT mice, and the decrease was more pronounced in the cells from the WT mice; LPS also induced more obvious changes in the levels of NF-κB/p65 and acetylized NF-κB/p65 in AECⅡs from the WT mice. Conclusion Sirt1 protects against LPS-induced injury in mouse AECⅡs and alleviates lung injuries in mice with acute respiratory distress syndrome by deacetylating RelA/p65 subunit of NF-κB.
[Key words] Sirt1     acute respiratory distress syndrome     type Ⅱ alveolar epithelial cells     nuclear factor-κB    

酵母沉默信息调节因子2相关酶1(Sirtuin type 1, Sirt1) 是酵母沉默信息调节因子2(Sir2) 的同源基因,是依赖NAD+的组蛋白去乙酰化酶。作为一种核蛋白,Sirt1广泛分布于人体各组织器官,参与炎症、脂质代谢、细胞应激、细胞凋亡/增殖等,而这些生理病理过程也正是急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)发生、发展的重要影响因素。因此,Sirt1被认为是炎症反应尤其是ARDS的关键元件和炎症反应调节剂之一[1]。研究发现乙酰白藜芦醇预处理激活Sirt1表达能减轻ARDS小鼠的炎症反应[2],但Sirt1参与ARDS发生、发展的机制目前仍未阐明。NF-κB是细胞炎症反应基因的重要转录激活因子,也是调控ARDS炎症反应的关键,RelA/p65亚基是NF-κB转录活性的关键部位; 而肺血管内皮-肺泡上皮屏障的损伤是ARDS的核心病理生理变化,肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)是构筑该屏障的重要组分。本研究以Sirt1过表达小鼠为基础,分析Sirt1在AEC Ⅱ LPS炎症损伤中对NF-κB的作用,为进一步理解Sirt1在ARDS病程中的作用机制提供依据。

1 材料与方法 1.1 材料

1.1.1 动物准备

Sirt1 super B6.Cg-Tg(Sirt1) ASrn/J(Tg小鼠)雄性小鼠2只、雌性野生型(WT)小鼠2只均购自美国Jackson实验室。饲养在第三军医大学新桥医院SPF(specific pathogen free)级动物层流隔离室,室内恒温20~26 ℃,照明12 h昼夜交替。小鼠饲料由第三军医大学新桥医院制备,并喂食花生米增加营养。饲养期间密切观察小鼠生长情况。采用8周以上小鼠按照雌雄1:1近亲繁殖,子代小鼠21 d断乳分笼,待8周后亦近亲繁殖。

1.1.2 主要试剂和实验设备

DNA提取扩增套装(TIANGEN),qRT-PCR试剂盒(All-in-One),TRIzol、RIPA强裂解液、BCA蛋白浓度检测试剂盒、Tris-base、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、Ⅰ型胶原酶、LPS(Biosharp),Mouse Sirt1 Antibody (C-term,ABGENT),Actin β Polyclonal Antibody(ruiying biological),NF-κB/p65 (Acetyl Lys310) Polyclonal Antibody(Immunology Way),小鼠IgG(Bioss),胰酶(Gibco),胎牛血清(Sciencell),碱性磷酸酶染色试剂盒、苏木精-伊红染液(武汉谷歌生物科技),SP-C兔多克隆抗体(Santa Cruz),羊抗兔IgG-FITC(中杉金桥),小鼠IL-6 ELISA检测试剂盒、小鼠TNF-α ELISA检测试剂盒(QuantiCyto),电泳设备(SDS-PAGE),PCR仪(Bio-Rad),水平电泳仪(北京六一),紫外分光光度计(Thermo),PCR仪(RotorGene GX-3000),酶标仪(BIO-TEK),倒置显微镜(尼康),组化笔(Gene tech)。

1.2 方法

1.2.1 动物基因型鉴定

① 基因组DNA提取。对10~12 d子代小鼠打耳标编号,并剪取0.5~1.0 cm尾巴进行基因型鉴定。按照TIANGEN快速DNA提取扩增套装提取基因组DNA:将尾巴放入1.5 mL EP管中,加裂解缓冲液200 μL,充分研磨后加入蛋白酶K 10 μL,56 ℃孵育过夜,95 ℃处理5 min,13 000 r/min离心5 min。将上清吸出,用紫外分光光度计进行DNA定量。② 聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)。引物由Jackson实验室提供,Tg上游引物: 5′-AGATAGTTCACCGGGGTGAGA-3′,下游引物:5′-TC-GGTCGAAGAGTATCTGGTG-3′,片段大小350 bp。内参上游引物:5′-CAAATGTTGCTTGTCTGGTG-3′,下游引物:5′-GTCAGTCGAGTGCACAGTTT-3′,片段大小200 bp。反应体系25 μL。扩增条件:95 ℃ 3 min; 95 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 1 min,35个循环; 72 ℃ 10 min; 10 ℃保温。

1.2.2 小鼠肺组织Sirt1表型鉴定 1.2.2.1 qRT-PCR检测小鼠Sirt1 mRNA表达差异

① TRIzol提取肺组织RNA:无菌条件下取出成年小鼠肺组织,100 mg肺加入1 mL Trizol,经异丙醇沉淀、75%乙醇洗涤后,用无酶水溶解RNA,紫外分光光度计进行RNA定量和质检。② 反转录反应。③ 实时荧光定量PCR检测:引物信息来自文献[3]。Sirt1上游5′-CCCTTCTCAGTCTGCTCCAC-3′,下游5′-CTCCA-CGAACAGCTTCACAA-3′; GAPDH上游:5′-ACCTTTGGCATTGTGGAAGG-3′,下游5′-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3′。扩增条件:95 ℃ 10 min; 95 ℃ 10 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 20 s检测荧光,40个循环; 72 ℃ 10 min; 10 ℃保温。结果用2-△ΔCt法进行数据分析。

1.2.2.2 Western blot检测小鼠Sirt1蛋白表达差异

① 肺组织蛋白准备:无菌条件下取出肺组织,100 mg肺加入1 mL含PMSF的RIPA强裂解液,冰上裂解30 min,12 000 r/min离心10 min,取上清,用BCA蛋白浓度测定法检测蛋白浓度。将抽提的蛋白定量后加入蛋白上样缓冲液,沸水中变性5 min,-20 ℃保存备用。② 蛋白电泳和显影:配制10% SDS-PAGE凝胶,蛋白上样后80 V恒压电泳至样品跑到浓缩胶与分离胶的分界处,120 V恒压电泳至溴酚蓝跑出电泳槽;300 mA恒流、4 ℃电转150 min将蛋白转印至PVDF膜(孔径0.22 μm);用含5%脱脂奶粉的TBST 37 ℃封闭1 h,加入兔抗鼠Sirt1抗体(1:500) 或兔抗鼠β-actin抗体(1:1 000) 4 ℃孵育过夜;TBST洗膜15 min×3次;加入山羊抗兔抗体(1:1 000) 37 ℃孵育1 h,TBST洗膜15 min×3次后敷上发光液,暗室曝光显影。

1.2.3 ARDS小鼠肺组织HE染色病理变化差异

① ARDS小鼠模型:随机选取Tg和WT成年小鼠各12只,分别随机分为实验组和对照组,实验组腹腔注射LPS 15 mg/kg[4],对照组腹腔注射生理盐水,自由进食水,12 h后处理。② 肺组织石蜡切片HE染色:无菌条件下取出肺组织,分别放入5 mL离心管中,用4%多聚甲醛固定24 h,经浸洗、脱水、浸蜡后,石蜡包埋、切片、制片,进行常规HE染色。

1.2.4 AECⅡ的分离培养和鉴定[5] 1.2.4.1 AECⅡ的分离

制备IgG包被6孔板和Ⅰ型胶原酶包被6孔板,室温保存。出生1 d的小鼠剪尾以备做PCR鉴定,无菌条件下取出肺组织,用5%血清+1%双抗的杜氏磷酸缓冲液(DPBS)冲洗,直至肺组织变成白色。将肺组织移入另一个培养皿中,剪碎,用含有0.1% Ⅰ型胶原酶(0.01 g/L)、5%胎牛血清的分解液4 ℃作用12 h,37 ℃孵育2 h,加入DMEM完全培养基,100 μm细胞筛网过滤至15 mL离心管,1 000 r/min离心5 min,弃上清,加PBS 1 mL重悬细胞。台盼蓝染色,血球计数板计数。

1.2.4.2 免疫粘附法细胞筛选

将细胞接种于小鼠IgG包被的培养皿中,培养3 h;吸取未贴壁的细胞800 r/min离心4 min,收集细胞,1×105/mL接种于Ⅰ型胶原酶包被6孔板。6 h后倒置显微镜下观察。

1.2.4.3 AECⅡ的鉴定

① 制备细胞爬片。② 碱性磷酸酶(ALP)染色[6]:4%多聚甲醛固定细胞爬片15 min,PBS漂洗3次,5 min/次; 破膜10~15 min,PBS漂洗3次,5 min/次;细胞爬片置于碱性磷酸酶孵育液中37 ℃孵育4 h,流水浸洗2 min,2%硝酸钴水溶液作用5 min,流水浸洗2 min,1%硫化铵水溶液处理30 s,流水浸洗2 min;苏木精染细胞核;中性树胶封片。③ SP-C免疫荧光[7]:4%多聚甲醛固定30 min,PBS洗3次,每次5 min;组化笔画圈,加50~100 μL破膜工作液,室温孵育10 min,PBS洗3次,每次5 min;滴加抗SP-C兔多克隆抗体(1:50),湿盒内4 ℃孵育过夜;滴加FITC荧光标记羊抗兔二抗(1:200),避光室温孵育50 min;DAPI复染细胞核,封片。

1.2.5 鉴定LPS损伤后AECⅡ IL-6和TNF-α的表达

根据PCR结果鉴定区分两种不同Sirt1基因背景的AEC Ⅱ,将两种AEC Ⅱ分别随机设置LPS 10 μg/mL[8]处理实验组和空白对照组。在0、2、4、6、8、12、24 h检测细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平。准备生物素化抗体工作液和酶结合物工作液,上样,36 ℃孵育90 min,加入生物素化抗体工作液,36 ℃孵育60 min,加入酶结合物工作液,36 ℃避光孵育30 min,加入显色底物(TMB)36 ℃避光孵育15 min,加入终止液,3 min内测量D(450) 值。

1.2.6 检测AECⅡ LPS损伤后NF-κB/p65蛋白和乙酰化NF-κB/p65蛋白表达差异

两种不同Sirt1基因背景的AECⅡ分别设置LPS损伤实验组和空白对照组,12 h后提取细胞总蛋白:弃掉培养液,用预冷的PBS洗细胞3次,刮脱细胞收集至离心管,1 000 r/min离心5 min,1×107个细胞加入1 mL细胞裂解液,吹打细胞至蛋白析出,14 000 r/min,4 ℃离心15 min。BCA法检测蛋白浓度。Western blot检测AECⅡ LPS损伤后NF-κB/p65蛋白、乙酰化NF-κB/p65蛋白表达差异[9]

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件,正态分布的资料用x±s描述,不符合正态分布或标准差过大的用中位数和四分位数表示,两组间均数比较采用t检验。

2 结果 2.1 基因型鉴定

通过DNA提取和PCR鉴定小鼠基因型,结果如图 1:1~4表达350 bp条带和200 bp条带,为Tg小鼠; 5~8只表达200 bp条带,为WT小鼠。

M:标准;1~4:Tg小鼠;5~8:WT小鼠 图 1 小鼠基因鉴定

2.2 小鼠肺组织Sirt1表型鉴定

qRT-PCR和Western blot鉴定小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白表达差异,发现Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA的表达水平显著高于WT小鼠(P=0.08),Tg小鼠肺组织蛋白的表达水平显著高于WT小鼠(P=0.015,图 2)。

1~3:Tg小鼠肺组织Sirt1;4、5:WT小鼠肺组织Sirt1 图 2 Western blot检测两组小鼠肺组织Sirt1蛋白表达

2.3 LPS处理小鼠肺组织HE染色病理变化差异

Tg小鼠和WT小鼠正常肺组织对比未见明显差异(图 3A~F)。腹腔注射LPS 15 mg/kg 12 h后,与WT小鼠相比,Tg小鼠肺组织损伤较轻。主要表现为WT小鼠比Tg小鼠肺组织弥漫性出血更明显,肺泡腔内红细胞漏出、肺泡间隔破坏更为严重,肺组织内中性粒细胞浸润更显著(图 3G~L)。

图 3 各组小鼠肺组织HE染色病理观察

2.4 AECⅡ的分离培养及鉴定

AECⅡ分离纯化后在光镜下呈圆形或立方形(图 4),ALP染色和SP-C免疫荧光鉴定细胞:ALP染色后阳性反应的细胞细胞质中表达深蓝色细颗粒状酶反应产物,细胞核被苏木精染成蓝色(图 5); 免疫荧光鉴定阳性细胞质内呈现绿色荧光,提示该细胞表达SP-C蛋白(图 6),阳性细胞比例>92%。

图 4 光镜下AECⅡ呈圆形或立方形(×200)

图 5 分离纯化的小鼠AECⅡ经碱性磷酸酶染色后倒置光学显微镜下观察(×400)

图 6 经SP-C免疫荧光染色后AECⅡ细胞的免疫荧光观察(×200)

2.5 ELISA检测LPS损伤后AECⅡ IL-6和TNF-α的表达

两种不同Sirt1背景的AECⅡ加LPS后IL-6和TNF-α的表达随时间推移逐渐增加,与0 h对比差异显著(P<0.01)。两种AECⅡ未加LPS刺激之前IL-6和TNF-α的表达差异无统计学意义(P=0.478);加入LPS 4、8、12、24 h后,WT小鼠AECⅡ上清液中IL-6、TNF-α的表达均显著高于Tg小鼠(P<0.05,P<0.01,图 7)。

A: IL-6 a: P<0.05,与Tg小鼠比较;B: TNF-α a: P<0.01,与Tg小鼠比较 图 7 ELISA检测LPS损伤后肺泡Ⅱ型上皮细胞IL-6和TNF-α的表达

2.6 AECⅡ LPS损伤后NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65表达差异

两种AECⅡ经LPS 10 μg/mL处理后,与各自的空白对照组相比Sirt1表达下降,且WT小鼠AECⅡ下降更明显,WT小鼠AECⅡ在LPS处理前后NF-κB/p65的变化倍数是Tg小鼠AECⅡ的1.77倍(P=0.004),乙酰化NF-κB/p65的变化倍数是Tg小鼠AECⅡ的2.91倍(P=0.040,图 8)。

1:Tg小鼠;2:WT小鼠;3:LPS处理后Tg小鼠;4:LPS处理后WT小鼠 图 8 Western blot检测肺泡Ⅱ型上皮细胞LPS损伤后NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65表达

3 讨论

炎症损伤是ARDS的重要事件,ARDS炎症损伤的主要靶细胞为AECⅡ和肺微血管内皮细胞。AECⅡ具有合成和分泌肺表面活性物质、转化为肺泡Ⅰ型上皮细胞、参与维持肺泡内液体平衡以及免疫防御等多种生理功能[10],因此明确AECⅡ在ARDS病程中的损伤机制对于ARDS的治疗具有重要意义。Sirt1因具有去乙酰化组蛋白和多种细胞因子的功能参与炎症、凋亡、自噬、氧化应激等多种生理病理过程,也在ARDS等多种疾病中具有重要作用。LPS是ARDS的重要生物致病因素之一,也广泛用于动物急性呼吸窘迫综合征模型的制备,因此本实验利用不同Sirt1基因背景小鼠来源的AECⅡ,由LPS构建动物和细胞炎症损伤模型分析Sirt1在ARDS中的作用,期望为ARDS中AECⅡ损伤机制研究提供更多实验数据。

3.1 Sirt1减轻了ARDS小鼠和AECⅡLPS损伤后的炎症反应

该实验所用Sirt1转基因小鼠来自Jackson实验室[3]。将小鼠繁殖后筛选鉴定基因型,以区分不同Sirt1基因背景的小鼠(图 1)。经qRT-PCR和Western blot检测(图 2),Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于WT小鼠,明确了Sirt1在小鼠肺部的表达情况,为后续实验奠定了基础。从LPS致伤动物和细胞两种模型的研究发现,Tg小鼠和Tg小鼠来源的AECⅡ比WT小鼠对LPS的抵抗性更强:表现为与WT小鼠相比LPS致伤Tg小鼠肺组织损伤程度较轻,而LPS致伤WT小鼠比Tg小鼠肺组织弥漫性出血更明显,肺泡腔内红细胞漏出、肺泡间隔破坏更为严重,肺组织内中性粒细胞浸润更显著(图 3G-IJ-L);Tg小鼠来源的AECⅡ LPS致伤后炎症因子的表达水平在多个时间点都低于WT小鼠AECⅡ(图 7)。有学者研究[2]发现乙酰化白藜芦醇(3,5,4′-Tri-O-acetylresveratrol,AC-Res)预处理激活Sirt1表达能减轻ARDS小鼠的炎症反应; 且AC-Res处理肺组织和白藜芦醇(resveratrol,Res)处理NR8383细胞均能显著降低LPS诱导的TNF-α、IL-6、IL-1β的产生和分泌。本实验观察到的现象与文献[2]的结论一致。这提示Sirt1能够减轻ARDS小鼠和AECⅡLPS损伤后的炎症反应,但Sirt1在ARDS中的作用机制仍然不清楚。

3.2 Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠AECⅡ LPS炎症损伤

NF-κB是细胞炎症反应基因的重要转录激活因子,细胞内LPS-钟形受体4 (toll like receptor 4,TLR4) 应答所致的炎症反应也通过经典的NF-κB信号通路。在生理和病理条件下NF-κB的两个活性基团p65和p50亚基需经过多种翻译后修饰才能发挥核转录因子作用,其中乙酰化是其行使转录活性的重要修饰。研究发现Sirt1能去乙酰化RelA/p65赖氨酸310残基,使NF-κB的转录活性下降[11-12]。因此,本实验对Sirt1在AECⅡ LPS损伤中对NF-κB的影响做进一步研究。两种不同Sirt1基因背景小鼠来源的AECⅡ经LPS(10 μg/mL)致伤后Sirt1表达均有不同程度的变化,WT小鼠AECⅡSirt1下降更为显著。两种AECⅡ的空白对照组间NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的表达量也有较大的差异,因此将LPS处理前后NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数进行比较,发现LPS致伤后WT小鼠AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数均高于Tg小鼠AECⅡ(图 8),因此推测:Tg小鼠AECⅡ LPS损伤后去乙酰化状态的NF-κB/p65较WT小鼠AECⅡ含量高。证明:LPS处理可下调Sirt1的表达,而Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65参与调控AECⅡ LPS炎症损伤,抑制ARDS小鼠肺部炎症反应。但两种AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65表达不同的原因以及Sirt1对NF-κB/p65是否还存在其他的作用位点和方式仍然不明,需要进一步探索。

参考文献
[1] MA L, ZHAO Y, WANG R, et al. 3, 5, 4'-Tri-O-acetylresveratrol attenuates lipopolysaccharide-induced acute respiratory distress syndrome via MAPK/SIRT1 pathway[J]. Mediat inflamm, 2015, 2015: 1–12. DOI:10.1155/2015/143074
[2] LIANG L, LIU X, WANG Q, et al. Pharmacokinetics, tissue distribution and excretion study of resveratrol and its prodrug 3, 5, 4'-tri-O-acetylresveratrol in rats[J]. Phytomedicine, 2013, 20(6): 558–563. DOI:10.1016/j.phymed.2012.12.012
[3] PFLUGER P T, HERRANZ D, VELASCO-MIGUEL S, et al. Sirt1 protects against high-fat diet-induced metabolic damage[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2008, 105(28): 9793–9798. DOI:10.1073/pnas.0802917105
[4] CHEN J K, WANG W C, ZANG L, et al. Repression of a chromatin modifier aggravates lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mouse[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 471(4): 515–521. DOI:10.1016/j.bbrc.2016.02.043
[5] GEREKE M, AUTENGRUBER A, GRöBE L, et al. Flow cytometric isolation of primary murine type Ⅱ alveolar epithelial cells for functional and molecular studies[J]. J Vis Exp Jove, 2012(70): e4322–e4322. DOI:10.3791/4322
[6] MEBAN C. Fine structural localization of alkaline phosphatase in the granular pneumonocytes of hamster lung[J]. Histochemistry, 1975, 43(4): 367–372. DOI:10.1007/bf00490195
[7] SWAIN R J, KEMP S J, GOLDSTRAW P, et al. Spectral monitoring of surfactant clearance during alveolar epithelial type Ⅱ cell differentiation[J]. Biophys J, 2008, 95(12): 5978–5987. DOI:10.1529/biophysj.108.136168
[8] GUO L, LI S, ZHAO Y, et al. Silencing angiopoietin-like protein 4 (ANGPTL4) protects against lipopolysaccharide-induced acute lung injury via regulating SIRT1 /NF-kB pathway[J]. J Cell Physiol, 2015, 230(10): 2390–2402. DOI:10.1002/jcp.24969
[9] PAN W, YU H, HUANG S, et al. Resveratrol protects against TNF-α-induced injury in human umbilical endothelial cells through promoting sirtuin-1-induced repression of NF-KB and p38 MAPK[J]. PLoS One, 2016, 11(1): e0147034. DOI:10.1371/journal.pone.0147034
[10] LUCAS R, VERIN A D, BLACK S M, et al. Regulators of endothelial and epithelial barrier integrity and function in acute lung injury[J]. Biochem Pharmacol, 2009, 77(12): 1763–1772. DOI:10.1016/j.bcp.2009.01.014
[11] YANG H, ZHANG W, PAN H, et al. SIRT1 activators suppress inflammatory responses through promotion of p65 deacetylation and inhibition of NF-κB activity[J]. PLoS One, 2012, 7(9): e46364. DOI:10.1371/journal.pone.0046364
[12] HWANG J W, YAO H, CAITO S, et al. Redox regulation of SIRT1 in inflammation and cellular senescence[J]. Free Radic Biol Med, 2013, 61: 95–110. DOI:10.1016/j.freeradbiomed.2013.03.015
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201611089
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

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刘俊彦, 吕学军, 赵维, 胡明冬, 李玉英, 王关嵩, 徐剑诚, 钱桂生.
LIU Junyan, LYU Xuejun, ZHAO Wei, HU Mingdong, LI Yuying, WANG Guansong, XU Jiancheng, QIAN Guisheng.
Sirt1通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞脂多糖损伤
Sirt1 protects against lipopolysaccharide-induced injury in mouse type Ⅱ alveolar epithelial cells by deacetylating RelA/p65 subunit of nuclear factor-κB
第三军医大学学报, 2017, 39(14): 1415-1421
Journal of Third Military Medical University, 2017, 39(14): 1415-1421
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201611089

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收稿: 2016-11-10
修回: 2017-02-06

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