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hoxb4转基因斑马鱼造血发育中rap1b基因的表达
刘冉冉1,2, 杨小燕2, 姬牧远2, 吴西军1,3, 范安然1,3, 舒莉萍1,3,4, 何志旭1,2     
1. 550004 贵阳,贵州医科大学:组织工程与干细胞实验中心;
2. 550004 贵阳,贵州医科大学:儿科学教研室;
3. 550004 贵阳,贵州医科大学:免疫学教研室;
4. 550004 贵阳,贵州医科大学:实验动物中心
[摘要] 目的 为了发现在早期造血发育中关键的调控因子,利用hoxb4转基因斑马鱼研究rap1b基因的表达变化情况,以期明确hoxb4rap1b在早期造血发育中的关系。 方法 选取过表达hoxb4的斑马鱼系为研究对象,分为3组:实验组(表达hoxb4 -EGFP的斑马鱼),实验对照组(表达EGFP的斑马鱼),空白对照组(野生型斑马鱼)。通过流式分选技术将实验对照组和实验组18hpf (斑马鱼胚胎受精发育18 h)、24、30、36、48 hpf胚胎中带有绿色荧光(enhanced green fluorescent protein,EGFP)信号的细胞分选出来,利用实时荧光定量PCR检测分选出的细胞中的rap1b基因的表达变化;然后收集野生型斑马鱼多时相胚胎,制备rap1b基因的反义mRNA探针,通过胚胎原位杂交观察探针在3组斑马鱼胚胎18、24、30、36、48 hpf杂交信号表达部位。 结果 qRT-PCR结果显示实验组30、36、48 hpf的斑马鱼胚胎的rap1b基因的表达明显增强(P < 0.05);制备了rap1b基因的反义mRNA探针,胚胎整体原位杂交结果显示:rap1b基因在3组斑马鱼胚胎18~48 hpf之间神经发育和造血发育部位都有表达。 结论 在过表达hoxb4转基因斑马鱼中rap1b基因表达有明显的升高趋势,提示rap1b基因与hoxb4基因可能共同参与调节早期造血发育过程。
[关键词] 造血发育     hoxb4     rap1b     斑马鱼    
Expression of rap1b in hoxb4 transgenic zebrafish during embryo hematopoietic development
Liu Ranran1,2 , Yang Xiaoyan2 , Ji Muyuan2 , Wu Xijun1,3 , Fan Anran1,3 , Shu Liping1,3,4 , He Zhixu1,2     
1. Research Center for Tissue Engineering and Stem Cells, Guizhou Medical University, Guiyang, Guizhou Province, 550004, China;
2. Department of Pediatrics, Guizhou Medical University, Guiyang, Guizhou Province, 550004, China;
3. Department of Immunology, Guizhou Medical University, Guiyang, Guizhou Province, 550004, China;
4. Laboratory Animal Center, Guizhou Medical University, Guiyang, Guizhou Province, 550004, China
Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China (31360285)
Corresponding author: Shu Liping, E-mail: gyslp456@gmc.edu.cn
He Zhixu, E-mail: hzx@gmc.edu.cn
[Abstract] Objective To investigate the expression pattern of rap1b gene in the zebrafish with hoxb4 transgene and the relationship between the 2 genes in early hematopoietic development so as to find critical regulatory factors in the early hematopoietic development. Methods Zebrafish with highly expressed hoxb4 were selected as the research object. There were 3 groups of zebrafish, namely the exprimental group (zebrafish expressed hoxb4 -EGFP), the control group (zebrafish only expressed EGFP) and the blank control group (wild type zebrafish). Embryo cells with EGFP fluorescence signals were sorted on 18 hours post fertilization (hpf), and 24, 30, 36 and 48 hpf respectively from control groups and experimental group. The expression of rap1b was examined with quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Then, the multi-phase embryos of wild type zebrafish were collected to prepare rap1b gene antisense mRNA probes, and the hybridization signals of rap1b in the 3 groups of zebrafish embryos were observed on 18, 24, 30, 36 and 48 hpf with whole-mount in situ hybridization (WISH). Results The results of qRT-PCR showed that the expression of rap1b gene was significantly enhanced on 30, 36 and 48 hpf in the experimental group (P < 0.05). Antisense mRNA probes of rap1b gene were successfully achieved, and WISH results showed that rap1b gene was expressed in the range of 18 to 48 hpf in the nervous system and the hematologic system in 3 groups of zebrafish embryos. Conclusion The expression of rap1b gene is obviously increased in hoxb4 transgenic zebrafish, suggesting that rap1b and hoxb4 may be both involved in the regulation of early hematopoietic development.
[Key words] hematopoietic development     hoxb4     rap1b     zebrafish    

同源盒基因(homeobox gene family)在胚胎发育和造血发育中发挥重要的调节作用,其家族成员hoxb4被认为是造血发育的重要调节因子[1]。已有实验证明hoxb4能够在体内外促进造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)扩增,增加了HSC自我更新的机率,但又不影响HSC分化成正常的成熟的各系血细胞,但是hoxb4如何调控这一过程,其分子机制并不清楚[2-3]。有研究提示,在爪蟾神经系统中过表达hoxb4可导致rap1基因表达的减弱,下调hoxb4基因使rap1的表达增强,遂得出rap1可能是hoxb4直接调控的下游靶基因[4]。为了进一步明确hoxb4基因是否通过rap1b基因调控胚胎期造血发育,本研究在前期建立的过表达hoxb4转基因斑马鱼[5]上观察rap1b基因的变化,以阐明二者对造血发育的调控作用,为揭示胚胎期造血发育的分子调控机制提供理论依据。

1 材料与方法 1.1 实验动物

1.1.1 饲养方法

斑马鱼胚胎置于28.5 ℃的生化培养箱中孵化,每天2次更换egg water,5~7 d开始喂食草履虫,10~14 d开始喂食丰年幼虫。待斑马鱼发育至性成熟,按雌雄3:1比例进行配对,成鱼置于28.5 ℃的自动循环系统饲养,雌雄分开饲养,每日喂食2次丰年幼虫,光照时间为12 h,黑暗12 h,交替进行光照。

1.1.2 鱼系

hoxb4转基因斑马鱼系Tg(zLmo2:LDL-hoxb4 -EGFP)为本实验室前期建立的转基因斑马鱼系[5]EGFP转基因斑马鱼系Tg(zLmo2:LDL-EGFP)、Cre转基因斑马鱼系Tg(zLmo2:Cre)由上海交通大学瑞金医院血液病研究所刘廷析教授课题组惠赠,本实验室繁殖饲养。

1.1.3 分组

分为3组:①实验组:为hoxb4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达hoxb4的带有EGFP荧光的胚胎Tg(zLmo2:LDL-hoxb4 -EGFP×zLmo2:Cre)。②实验对照组:为EGFP转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的表达EGFP荧光的胚胎Tg(zLmo2:LDL-EGFP×zLmo2:Cre)。③空白对照组:为野生型斑马鱼Tuebingen的胚胎。

1.2 流式分选

首先获取实验组和实验对照组(因空白对照组斑马鱼胚胎体内无EGFP荧光,故没有筛选)斑马鱼胚胎受精发育18 h (18 hpf)、24、30、36、48 hpf的胚胎各200枚(未破膜的胚胎要先进行剥膜),将上述胚胎按照不同组不同时相分别研磨,用0.25%的胰酶消化30~40 min,再用FBS终止消化,最后通过BD Falion 40 μm尼龙滤网过滤,制得单细胞悬液,用美国贝克曼库尔特公司的流式细胞分选仪MoFLo XDP在荧光激发下分选出绿色荧光细胞。

1.3 实时荧光定量PCR

用TRIzol® Reagent (美国Invitrogen公司)分别提取上述筛选出的两组不同时相细胞的总RNA,将提取的总RNA用First Strand cDNA Synthesis Kit试剂按试剂盒说明书进行反转录合成cDNA。按照IQTM SYBR Green Supermix试剂盒说明的反应体系进行扩增,扩增条件:95 ℃ 15 min;95 ℃ 10 s,59.4 ℃ 20 s,72 ℃ 20 s,40个循环。溶解曲线:每5 s升高0.5 ℃,从65 ℃到95 ℃。以GAPDH、β-actin作为内参基因,对rap1b基因进行相对定量分析。rap1b基因及内参基因GAPDH、β-actin的引物由北京奥维森基因科技公司合成(表 1)。

表 1 斑马鱼rap1b及内参基因的PCR引物序列
基因 NCBI序号 引物(5′→3′) 片段长度
(bp)
rap1b ID:321107 上游:GCGGGTGGGCACAGAT
下游:GCCGGACCAGGTCATAGAAA
189
GAPDH NM_001115114 上游:ACCCGTGCTGCTTTCTTGAC
下游:GACCAGTTTGCCGCCTTCT
91
β-actin NM_131031 上游:ATGCCCCTCGTGCTGTTTT
下游:TCTGTCCATGCCAACCAT
87

1.4 制备rap1b基因的反义mRNA探针

rap1b基因mRNA序列根据UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu)检索,并加入EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点以及保护碱基序列,用Primer 5.0软件设计引物,由北京奥维森基因科技有限公司合成,引物序列上游:5′-CGGGATCCATGCGTGAATACAAG-3′,下游:5′-CGGAATTCGAGCAACTGGCAGGT-3′。PCR扩增条件:95 ℃预变性2 min;95 ℃变性30 s,59 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共30个循环;最后延伸72 ℃ 10 min,PCR产物大小为554 bp,得到克隆的斑马鱼rap1b基因片段,将得到的rap1b基因片段用EcoRⅠ以及BamHⅠ双酶切后和用同样两种酶切的pCS2+质粒进行T4 DNA连接酶连接重组,然后用测序的方法鉴定重组质粒pCS2+-rap1b,序列比对正确后,将质粒pCS2+-rap1bEcoRⅠ单酶切线性化,最后体外转录合成地高辛标记的rap1b基因的反义mRNA探针,冻存-80 ℃备用。

1.5 胚胎整体原位杂交

收集3组18、24、30、36、48 hpf的胚胎进行原位杂交,每管约30枚胚胎(24 hpf以后的胚胎需用含0.003%PTU的egg water培养,防止色素生成)。使用Fix液固定胚胎,再用甲醇脱水,1×PBST清洗胚胎后用Protease K使胚胎通透,用Hybe (-)杂交液进行预杂交,后加入上述制备的rap1b基因的反义mRNA探针放于65 ℃杂交炉内过夜。用不同浓度梯度的SSC液洗去多余的探针,后加入地高辛抗体过夜,最后加入BCIP/NBT染液进行染色,后将胚胎移入新的EPP管中,再用1×PBST洗涤后用4%的多聚甲醛1 mL固定,在成像系统下采集图像保存。

1.6 统计学分析

将Bio-Rad CFX manager 2.0软件自动生成的数据使用SPSS Statistics 20.0进行统计分析,计量资料先进行正态性检验,样品呈正态分布时,采用x±s表示,两两比较使用t检验,检验水准α=0.05。

2 结果 2.1 流式分选细胞

选取细胞相对集中的区域进行分析,目的是除去细胞碎片和死亡细胞,图 1A所示R1所圈取的细胞占总细胞数量的63.52%;然后分选出EGFP荧光信号较强的细胞(图 1B),用此方案分别分选出实验组和实验对照组18、24、30、36、48 hpf的细胞,用于后续的实验。

A:细胞内颗粒的大小和多少,R1区域所圈取的细胞用于图B的筛选;B:信号强度,R2所圈取的就是分选出的细胞 图 1 斑马鱼胚胎的单细胞悬液分选图

2.2 各组斑马鱼胚胎中的rap1bmRNA的定量分析

斑马鱼β-actin、GAPDH、rap1b基因的溶解曲线均为单峰曲线,说明所扩增的目的基因引物设计良好,在使用所选择的最适温度时,无非特异性产物生成;并且扩增曲线光滑、连续,多次重复,结果较好。由图 2可知实验组和对照组rap1b基因的mRNA表达量在18~36 hpf期间随着胚胎的发育而逐渐增加,在36hpf增加比较明显;48 hpf的rap1b基因的mRNA表达量较前一时相明显减少;同时实验组的30、36、48 hpf斑马鱼胚胎rap1b基因的mRNA表达量均高于对照组(P < 0.05),且36 hpf的差异明显。

a:P < 0.05,与实验对照组比较 图 2 各组不同时相的斑马鱼rap1b基因mRNA表达变化

2.3 斑马鱼rap1b基因PCR结果

rap1b基因PCR产物经凝胶电泳鉴定,在500~800 bp可见一条特异扩增条带,大小与预期相符(图 3)。

1:DNA Marker Ⅲ;2:rap1b基因PCR产物 图 3 rap1b基因片段PCR扩增产物电泳鉴定结果

2.4 重组质粒pCS2+-rap1b酶切和测序鉴定结果

将重组质粒pCS2+-rap1bEcoRⅠ以及BamHⅠ双酶切后凝胶电泳,可见两条带,大小分别是554、4 654 bp,与重组质粒pCS2+-rap1b双酶切产物和质粒pCS2+双酶切产物大小相符(图 4)。重组质粒pCS2+-rap1b测序结果与在UCSC上检索到的rap1b基因的mRNA序列完全一致。

1:DNA Marker Ⅲ;2:质粒pCS2+-rap1b双酶切产物;3:质粒pCS2+双酶切产物 图 4 重组质粒pCS2+-rap1b双酶切产物鉴定结果

2.5 斑马鱼早期胚胎发育过程中rap1b的时空表达

采用上述制备的探针对斑马鱼的胚胎进行整体原位杂交,结果见图 5。在18 hpf斑马鱼胚胎中发现rap1b主要在胚胎的中后脑边缘、中间细胞群(intermediate cell mass, ICM)、尾芽表达;在24 hpf斑马鱼胚胎中发现rap1b的表达与18 hpf斑马鱼胚胎中的表达部位相同。随着胚胎的发育,rap1b的表达部位也有所改变,在30 hpf斑马鱼胚胎中发现rap1b的表达主要在后脑边缘、脊索神经系统、后部血岛(posterior blood island, PBI);在36 hpf斑马鱼胚胎中发现rap1b在后脑边缘、脊索神经系统、PBI区有表达,并且在后脑边缘区、脊索神经系统各组之间无显著差异,但在PBI区,过表达hoxb4的斑马鱼胚胎杂交信号明显比对照组增强,在48 hpf斑马鱼胚胎中发现rap1b表达在耳蜗、脊索神经系统、PBI区。

3组18~48 hpf的斑马鱼胚胎中rap1b基因的原位杂交信号用箭头指出(神经系统用绿色箭头,血液系统用红色箭头);在36 hpf时,实验组造血部位的杂交信号范围和强度明显强于对照组 图 5 各组不同时相的斑马鱼rap1b基因整体胚胎原位杂交结果(FISH ×30 ×40)

3 讨论

20世纪90年代斑马鱼作为模式生物逐渐被科学研究者所重视,相比较于其他模式生物,其优势在于:体外受精,胚胎透明,繁殖力强(每周可产胚胎200枚左右),在受精后24 h主要器官原基基本形成,成鱼体长3~4 cm,繁殖一代周期2~3个月,经济适用;并且发现斑马鱼基因与人类基因保守度约85%。斑马鱼基因组测序已基本完成,而且胚胎通体透明便于观察,因此斑马鱼常被作为研究造血发育的模式生物[6-8]

过表达hoxb4能加强HSC的自我更新和增殖的能力,而且未导致血液系统的恶性肿瘤[2],本实验室前期的实验结果也证明了这一点[5]。但关于hoxb4如何平衡HSC的增殖和分化,其中的分子机制先前的报道并未阐述。以往的基因研究分析在不同的发育系统,与hoxb4有关的调控基因有所不同,然而这些研究所确定调控基因有一部分的重叠。本实验就是探究在造血发育过程中与hoxb4相关的调控基因。

rap1是一个很小的GTP结合蛋白(guanosine triphosphatase,GTPase),是Ras超家族中的一员,携带有和Ras相类似的作用区。rap1和其他GTPase一样,与GTP结合后被激活,发挥作用后以无活性的状态存在。作为一个进化保守的蛋白质,研究表明rap1可以通过第二信使在调节细胞的黏连、细胞迁移,细胞极性和细胞的增殖与分化方面都发挥着重要的作用[9-10]。在低等生物体内,仅有一个同源基因rap1在细胞极性的发育中起重要作用,在高等生物体内,同时存在两个高度同源的rap1基因:rap1arap1b,这两个编码的亚型基因已经被分离出[11]。敲除其中一个亚型可能会出现局部出血和部分胚胎的死亡,然而敲除其中一个亚型并不影响实验动物的生存寿命,但在免疫应答[12]和造血发育方面有一定缺陷,rap1b基因可以影响心血管的功能[13]、血小板的黏附作用[14]、血管的发生[15],以及血管平滑肌的收缩和血管张力[16]。Gore等[17]研究显示,在内皮细胞连接形成阶段,如果单独敲除rap1b基因,会引起颅内出血;Chrzanowska-Wodnicka等[18]指出rap1a缺陷的小鼠没有明显变化,但是在rap1b缺陷的情况下,小鼠会出现视网膜新生血管的缺失,而且因rap1b缺陷所引起的血管内皮生长因子的下调,导致小鼠体内基底膜基质的入侵和主动脉瓣环的发育缺陷;Dong等[9]用反义寡核苷酸抑制斑马鱼胚胎中的rap1b的表达,胚胎出现心脏的缺陷、躯干弯曲及尾鳍的缺陷、颅内出血。这些实验都证明了rap1b对造血发育有一定的调控作用,但rap1bhoxb4在造血发育方面的关系并未有报道。

本实验首先通过流式细胞分选技术将斑马鱼胚胎中带有EGFP荧光的细胞分选出来,对过表达hoxb4斑马鱼系和正常表达hoxb4斑马鱼系中的rap1b基因进行相对定量检测。qRT-PCR结果显示实验组和对照组rap1b基因的mRNA表达量在18~36 hpf期间随着胚胎的发育而逐渐增加,在36 hpf增加比较明显,48 hpf的rap1b基因的mRNA表达量较前一时相明显减少;30、36、48 hpf斑马鱼胚胎rap1b基因的mRNA表达量实验组均高于对照组(P < 0.05),且36 hpf的差异明显。然后对3组斑马鱼胚胎以rap1b基因反义mRNA探针整体胚胎原位杂交后,通过显微镜观察,18、24、30 hpf原位杂交信号在中间细胞团和后部造血岛区域都能观测到。这些都是斑马鱼胚胎在造血发育过程主要的造血区域,且原位杂交图片显示36hpf实验组斑马鱼rap1b基因杂交信号在后部造血岛,其表达范围及表达量较其他两对照组明显增多,这都提示rap1b参与了斑马鱼的造血发育,并且在此过程中与hoxb4基因的表达有关。由以上结果可以推论,rap1b基因不仅参与了斑马鱼造血过程的调控,同时它在造血系统中的表达情况与hoxb4基因表达有关。

本实验初步研究了在18~48 hpf期间rap1b基因表达部位与斑马鱼造血发育过程中的造血部位高度一致,并且在过表达hoxb4转基因斑马鱼中rap1b基因表达有明显的升高趋势,提示rap1b基因与hoxb4基因可能共同参与调节早期造血发育过程,这就为进一步研究在造血发育过程中rap1b作为hoxb4下游靶基因的可能性及其相互作用奠定了充实的基础。

参考文献
[1] Yasunaga S, Ohno Y, Shirasu N, et al. Role of Geminin in cell fate determination of hematopoietic stem cells (HSCs)[J]. Int J Hematol,2016, 104 (3) : 324 –329. DOI:10.1007/s12185-016-2060-9
[2] Jackson M, Ma R, Taylor A H, et al. Enforced Expression of HOXB4 in Human Embryonic Stem Cells Enhances the Production of Hematopoietic Progenitors but Has No Effect on the Maturation of Red Blood Cells[J]. Stem Cells Transl Med,2016, 5 (8) : 981 –990. DOI:10.5966/sctm.2015-0324
[3] Xin C, Zhao C, Yin X, et al. Bioinformatics analysis of molecular mechanism of the expansion of hematopoietic stem cell transduced by HOXB4/HOXC4[J]. Hematology,2016, 21 (8) : 462 –469. DOI:10.1080/10245332.2015.1101978
[4] Morsi El-Kadi A S, in der Reiden P, Durston A, et al. The small GTPase Rap1 is an immediate downstream targetfor Hoxb4 transcriptional regulation[J]. Mech Dev,2002, 113 (2) : 131 –139. DOI:10.1016/S0925-4773(02)00047-3
[5] Shu L P, Zhou Z W, Zhou T, et al. Ectopic expression of Hoxb4a in hemangioblasts promotes hematopoietic development in early embryogenesis of zebrafish[J]. Clin Exp Pharmacol Physiol,2015, 42 (12) : 1275 –1286. DOI:10.1111/1440-1681.12483
[6] He J H, Gao J M, Huang C J, et al. Zebrafish models for assessing developmental and reproductive toxicity[J]. Neurotoxicol Teratol,2014, 42 : 35 –42. DOI:10.1016/j.ntt.2014.01.006
[7] Zhang C, Patient R, Liu F. Hematopoietic stem cell development and regulatory signaling in zebrafish[J]. Biochim Biophys Acta,2013, 1830 (2) : 2370 –2374. DOI:10.1016/j.bbagen.2012.06.008
[8] Rastegar S, Strahle U. The Zebrafish as Model for Deciphering the Regulatory Architecture of Vertebrate Genomes[J]. Adv Genet,2016, 95 : 195 –216. DOI:10.1016/bs.adgen.2016.04.003
[9] Dong W, Yang Z, Yang F, et al. Suppression of Rap1 impairs cardiac myofibrils and conduction system in zebrafish[J]. PLoS One,2012, 7 (11) : e50960 . DOI:10.1371/journal.pone.0050960
[10] Azoulay-Alfaguter I, Strazza M, Mor A. Chaperone-mediated specificity in Ras and Rap signaling[J]. Crit Rev Biochem Mol Biol,2015, 50 (3) : 194 –202. DOI:10.3109/10409238.2014.989308
[11] Zhang H, Chang Y C, Brennan M L, et al. The structure of Rap1 in complex with RIAM reveals specificity determinants and recruitment mechanism[J]. J Mol Cell Biol,2014, 6 (2) : 128 –139. DOI:10.1093/jmcb/mjt044
[12] Kumar S, Xu J, Kumar R S, et al. The small GTPase Rap1b negatively regulates neutrophil chemotaxis and transcellular diapedesis by inhibiting Akt activation[J]. J Exp Med,2014, 211 (9) : 1741 –1758. DOI:10.1084/jem.20131706
[13] Chrzanowska-Wodnicka M, White G C 2nd, Quilliam L A, et al. Small GTPase Rap1 Is Essential for Mouse Development and Formation of Functional Vasculature[J]. PLoS One,2015, 10 (12) : e0145689 . DOI:10.1371/journal.pone.0145689
[14] Szklanna P B, Foy M, Wynne K, et al. Analysis of the proteins associated with platelet detergent resistant membranes[J]. Proteomics,2016, 16 (17) : 2345 –2350. DOI:10.1002/pmic.201500309
[15] Lakshmikanthan S, Sobczak M, Chun C, et al. Rap1 promotes VEGFR2 activation and angiogenesis by a mechanism involving integrin αvβ3[J]. Blood,2011, 118 (7) : 2015 –2026. DOI:10.1182/blood-2011-04-349282
[16] Lakshmikanthan S, Zieba B J, Ge Z D, et al. Rap1b in smooth muscle and endothelium is required for maintenance of vascular tone and normal blood pressure[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol,2014, 34 (7) : 1486 –1494. DOI:10.1161/ATVBAHA.114.303678
[17] Gore A V, Lampugnani M G, Dye L, et al. Combinatorial interaction between CCM pathway genes precipitates hemorrhagic stroke[J]. Dis Model Mech,2008, 1 (4/5) : 275 –281. DOI:10.1242/dmm.000513
[18] Chrzanowska-Wodnicka M, Kraus A E, Gale D, et al. Defective angiogenesis, endothelial migration, proliferation, and MAPK signaling in Rap1b-deficient mice[J]. Blood,2008, 111 (5) : 2647 –2656. DOI:10.1182/blood-2007-08109710
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201608093
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刘冉冉, 杨小燕, 姬牧远, 吴西军, 范安然, 舒莉萍, 何志旭.
Liu Ranran, Yang Xiaoyan, Ji Muyuan, Wu Xijun, Fan Anran, Shu Liping, He Zhixu.
hoxb4转基因斑马鱼造血发育中rap1b基因的表达
Expression of rap1b in hoxb4 transgenic zebrafish during embryo hematopoietic development
第三军医大学学报, 2017, 39(3): 243-248
Journal of Third Military Medical University, 2017, 39(3): 243-248
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201608093

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收稿: 2016-08-19
修回: 2016-09-12

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