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新型雌激素受体GPER在乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药中的作用及机制
朱 庆1, 伍俊仪2, 袁 杰1, 杨海兵1, 陈茂山1, 杨光伦1    
1. 400016 重庆,重庆医科大学附属第一医院内分泌外科
2. 405800 重庆,重庆市巫溪县人民医院妇产科
摘要目的 研究乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中新型雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对促凋亡蛋白Bim的影响及其机制。 方法 倒置显微镜下观察MCF-7和MCF-7R经过浓度为1 μmol/L的他莫昔芬(tamoxifen,TAM)处理后细胞形态的变化;qRT-PCR检测人乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药株MCF-7R中促凋亡蛋白Bim(Bcl-2L11)的mRNA表达水平,Western blot检测两种细胞株Bim蛋白表达水平和两种细胞中总的GPER和膜上GPER的表达水平;两种细胞中分别以(无水乙醇、TAM、GPER特异性抑制剂G15+TAM、GPER特异性激动剂G1)处理后,检测Bim的蛋白表达水平;MCF-7R细胞中分别抑制PI3K-Akt及MAPK/Erk两条信号通路后,再加入TAM,检测Bim的蛋白水平;流式细胞术检测细胞凋亡。 结果 倒置显微镜下发现MCF-7细胞经TAM处理后细胞大部分变透亮且悬浮,而MCF-7R无明显变化;MCF-7R细胞中促凋亡蛋白Bim的mRNA水平及蛋白水平较MCF-7都降低(P < 0.05);耐药细胞中总GPER的蛋白表达量较MCF-7无明显变化而膜上的表达量升高(P < 0.05);MCF-7经TAM处理后,Bim蛋白表达量增加(P < 0.05),而MCF-7R中却无明显变化,但在MCF-7R中加入GPER特异性抑制剂G15后再用TAM处理,Bim蛋白水平增加(P < 0.05);耐药细胞中PI3K/AKT及MAPK/Erk信号通路处于活化状态,抑制MAPK/Erk信号通路后再加入TAM,耐药细胞中促凋亡蛋白Bim的表达量增加(P < 0.05);在MCF-7中加入TAM后细胞凋亡率明显升高(P < 0.05),MCF-7R经TAM处理后无明显差异,但抑制GPER或Erk信号通路后,再加入TAM处理,细胞凋亡率明显增高(P < 0.05)。 结论 乳腺癌TAM耐药细胞MCF-7R中TAM作为GPER的激动剂,活化信号通路MAPK/Erk抑制Bim表达。抑制GPER或MAPK/Erk信号通路,可使耐药细胞对TAM恢复敏感性。
关键词乳腺癌     他莫昔芬耐受     Bim     GPER/GPR30     细胞凋亡    
Role of G protein-coupled estrogen receptor in tamoxifen-resistant breast cancer MCF-7 cells
Zhu Qing1, Wu Junyi2, Yuan Jie1, Yang Haibing1, ,Chen Maoshan1, Yang Guanglun1     
1. Department of Endocrology and Breast Surgery,the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing,400016;
2. Department of Obstetrics and Gynecology,the People’s Hospital of Wuxi Country,Chongqing,405800,China
Supported by the General Program of National Nature Science Foundation of China (81072149).
Corresponding author: Yang Guanglun,E-mail: guanglunyang@ 163.com
Abstract: Objective To investigate the effect of G protein-coupled estrogen receptor (GPER) on pro-apoptotic protein Bim in tamoxifen (TAM)-resistant breast cancer cells MCF-7R and related mechanism. Methods Human breast cancer cells MCF-7 and the MCF-7R cells were treated with 1 μmol/L TAM,and the cell morphological change was observed with an inverted microscope. The Bim mRNA expression was detected by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) in the MCF-7 cells and MCF-7R cells. The expression of Bim protein,total GPER,and GPER in the cell membrane was detected by Western blotting. After the two kinds of cells were treated with ethanol,TAM,TAM+G15 (GPER specific inhibitor),and G1 (GPER specific agonist),the Bim protein expression was analyzed by Western blotting. After inhibiting the PI3K/AKT and MAPK/Erk signaling pathways in the MCF-7R cells,TAM was added,and then the Bim protein expression was assayed. Flow cytometry was adopted to detect cell apoptosis. Results After treatment with TAM,most of MCF-7 cells became bright and were suspended,while the MCF-7R cells had no obvious changes. The levels of Bim mRNA and protein in the MCF-7R cells were obviously lower than those in the MCF-7 cells (P < 0.05). The total GPER had no significant difference between the 2 kinds of cells,but GPER in the cell membrane was increased in the MCF-7R cells (P < 0.05). The expression of Bim protein was increased in the MCF-7 cells treated with TAM (P < 0.05),but not in the MCF-7R cells. However,Bim protein was increased in the MCF-7R cells treated with G15 and then TAM (P < 0.05). The PI3K/AKT and MAPK/Erk signaling pathways stayed in the activated stage in the MCF-7R cells. When TAM was added after inhibiting MAPK/Erk pathway rather than PI3K/AKT pathway,the Bim protein was significantly increased (P < 0.05).TAM could promote the apoptosis of the MCF-7 cells,but not the MCF-7R cells. However,the apoptosis of MCF-7R cells was increased after GPER or MAPK/Erk signaling pathway was inhibited and then TAM was added (P < 0.05). Conclusion TAM as GPER agonist can activate the MAPK/Erk signaling pathway and inhibit the Bim expression in the MCF-7R cells. The MCF-7R cells are sensitive to TAM again through inhibiting GPER or MAPK/Erk signaling pathway.
Key words: breast cancer     tamoxifen resistance; Bim     Bim     GPER/GPR30     cell apoptosis    

G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER/GPR30)是独立于雌激素受体ERα和ERβ的一种新型雌激素受体,通过反式作用于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),激活下游信号通路,产生一系列生物学效应。研究GPER在乳腺癌细胞MCF-7内分泌耐药中的作用时,发现他莫昔芬(tamoxifen,TAM)可作为GPER的激动剂[1, 2]。本课题组前期已成功从乳腺癌MCF-7细胞中诱导出TAM耐受的细胞株MCF-7R细胞[3],并发现在耐药株中GPER总表达量没明显变化,但其从细胞质中转移到胞膜上,处于异常活化状态[1]。研究表明,乳腺癌细胞在发生他莫昔芬耐受后,细胞的恶性程度会增加,从而加快肿瘤的复发与转移[4, 5]。Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡中起到重要的作用,Bim蛋白是Bcl-2蛋白家族3种亚型中唯一有促凋亡作用的一个亚型BH3-only促凋亡蛋白(BID、BAD、BIM、PUMA、NOXA及BIK)中的一员[6, 7]。Bim、BIK等Bcl-2家族蛋白在乳腺癌他莫昔芬及其他抗肿瘤药物耐药中的作用被广泛研究[8, 9]。Bim在乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤中作为促凋亡因子被广泛研究,且作为肿瘤细胞对阿霉素、紫杉醇等抗肿瘤药物是否有效中起到标示性的作用[10, 11]。本研究发现乳腺癌细胞MCF-7发生TAM耐药后,细胞形态发生明显变化,且对他莫昔芬敏感性减低,MCF-7R中促凋亡蛋白Bim的表达水平明显降低,推测Bim可能为TAM促进细胞凋亡的作用蛋白,以及分析MCF-7R中GPER对Bim蛋白的调控及其机制。

1 材料与方法 1.1 主要试剂

人乳腺癌MCF-7细胞购自中科院上海细胞库,胎牛血清购于Biolnd公司,1640培养基购于Gibco公司,4-羟基他莫昔芬(OHT)、GPER特异性激动剂G1及其特异性拮抗剂G15等购于Sigma公司,Annexin V-FITC购于美国BD公司,细胞外信号调节激酶1/2(extra-cellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)抑制剂U0126、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002、BCA测蛋白浓度试剂盒、膜蛋白细胞组分提取试剂盒等购于碧云天生物技术有限公司,兔源性抗GPER购于Abcam公司。鼠 抗人β-actin单克隆抗体、qRT-PCR试剂盒购于TaKaRa公司,兔源性抗体(抗Bim、p-AKT、AKT、P-ERK1/2、Erk1/2)等购于Bioword公司。

1.2 细胞培养

人乳腺癌MCF-7细胞常规培养于10%胎牛血清的1640培养基、MCF-7他莫昔芬耐药株(MCF-7R细胞)前期研究中使用高浓度短期TAM冲击法诱导,已成功构建。为维持细胞的耐药性,常规培养在含有100 nmol/L OHT、5%胎牛血清的1640培养液中、 37 ℃、5% CO2细胞培养箱中,细胞生长密度达80%~ 90%时,0.125%蛋白胰酶消化传代。用于实验或加药处理的细胞均需处于对数生长期。

1.3 倒置显微镜下观察两种细胞经TAM处理后的形态

处于对数生长期的两种细胞,经0.125%蛋白胰 酶消化后,接种于6孔板中,使细胞密度在 30% ~ 40%,待细胞贴壁后,MCF-7R先换成无TAM的含5%胎牛血清的培养基撤药配药24 h,后两种细胞同时换车无血清的培养基饥饿24 h。再分别在两种细胞中加入无水乙醇作为对照组;1 μmol/L的TAM为实验组,继续培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞情况。

1.4 qRT-PCR检测Bim基因的表达

提取MCF-7细胞及MCF-7R细胞的总RNA,并且反转录成cDNA,以β-actin为内参,进行qPT-PCR检测Bim(Bcl2L11)基因mRNA的表达水平。Bim(Bcl2L11)引物序列:上5′-CCTTTCTTGGCCCTTGTTCC-3′,下游5′-TTGTGGCTCTGTCTGTAGGG-3′,扩增片段 197 bp;β-actin引物序列:上游5′-CACCCCACTTCTCTCTAAGG-3′,下游5′-AAAAAGTATTAAGGCGA-AGAT-3′,扩增片段为126 bp;反应条件:95 ℃预变性15 s,95 ℃变性5 s,53 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共35个循环,重复3次实验。

1.5 Western blot 检测

待MCF-7细胞及MCF-7R细胞生长密度至80%~ 90%,用0.125%胰蛋白酶消化,以40%~50%密度接种至培养皿内,待细胞生长至一定密度后提取细胞总蛋白。若需要加药处理的实验,接种细胞后培养24 h待细胞贴壁后,耐药细胞则先撤药(无TAM的含5%血清的培养基)培养24 h,然后两种细胞换无血清培养基继续饥饿培养24 h,两种细胞分别加入(无水乙醇为对照组;1 μmol/L的TAM、1 μmol/L的G15 1 h后再加入1 μmol/L的TAM、1 μmol/L的G1为实验组)24 h后提取总蛋白,膜蛋白提取按照厂家说明操
作;MCF-7R经过相同细胞培养后分别加入(1 μmol/L无水乙醇为对照组;先10 μmol/L U0126和10 μmol/L Y294002 0.5 h后加入1 μmol/L TAM、单独加1 μmol/L TAM为实验组)24 h后提取总蛋白。采用BCA法测定蛋白浓度,经SDS-PAGE电泳分离、转膜,5%脱脂奶粉温室摇床封闭2 h或在4 ℃冰箱封闭过夜,分别加入兔抗人Bim、GPER、p-ERK、ERK1、p-AKT、AKT多克隆抗体(1 ∶500稀释)和鼠抗人β-actin单克隆抗体(1 ∶1 000稀释),4 ℃过夜>16 h;TBST洗膜3次,5~10 min/次,然后分别加入HRPG标记的羊抗兔或羊抗鼠IgG(1 ∶1 000稀释),室温孵育2 h;TBST洗膜3次后,ECL化学显色剂显色。Quantity One软件进行灰度值的半定量分析。

1.6 流式细胞术检测细胞凋亡

两种细胞铺至6孔板,1×105个细胞每孔,待所有细胞贴壁后,MCF-7R及MCF-7各自经过撤药、饥饿处理后,加入药物处理24 h。然后消化各组细胞,收集细胞离心后倒掉上清,再用PBS重悬清晰重复2次后,用500 μL重悬加入荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V-FITC)室温下避光孵育10 min,再加入碘化丙啶(PI)室温避光孵育5 min,然后立即用流式细胞仪分析。

1.7 统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件,计量资料数据用 ±s表示,两个独立样本资料组间数据采用t检验,多组样本均数比较采用方差分析。

2 结果 2.1 两种细胞经他莫昔芬处理后的细胞形态变化

MCF-7细胞经TAM处理后,从完全伸展开的,扁平状贴壁细胞,变成空泡样透亮的悬浮状态,这意味着MCF-7细胞经TAM处理后,发生大量死亡;而在耐药细胞MCF-7R中,TAM处理后,细胞形态无明显变化,这说明耐药株在敏感株敏感的TAM浓度下,已失去了敏感性。见图1

A:MCF-7对照组;B:MCF-7 TAM;C:MCF-7R对照组;D:MCF-7R TAM 图 1 倒置显微镜观察两种细胞经他莫昔芬处理后的形态变化(×200)
2.2 两种细胞内Bim的mRNA及蛋白表达水平

qRT-PCR检测到乳腺癌细胞MCF-7内Bim的mRNA表达(0.997±0.09),而在其他莫昔芬耐药株MCF-7R中的表达(0.278±0.021),较MCF-7明显降低(P < 0.05)。MCF-7R中的Bim蛋白表达量较MCF-7明显较低(P < 0.05),见图2

1:MCF-7;2:MCF-7R 图 2 Western blot检测两种细胞内Bim蛋白的表达
2.3 MCF-7R中GPER的活化抑制Bim的蛋白水平

分别在MCF-7及MCF-7R细胞中予以无水乙醇、TAM、G15+TAM、G15等处理后,各组提取总蛋白。Western blot结果显示:在MCF-7中加入TAM后Bim蛋白的表达量增加(P < 0.05),在MCF-7R中加入TAM后Bim的表达无明显变化(P>0.05),而先加入G15后再加入TAM后Bim的表达量明显增高(P>0.05),见图3

A:Western blot检测;B:半定量分析(n=8, ±s) 1:MCF-7对照组;2:MCF-7 TAM;3:MCF-7 G15+TAM;4: MCF-7 G1;5:MCF-7R对照组;6: MCF-7R TAM;7: MCF-7R G15+TAM;8:MCF-7R G1 a:P < 0.05,与MCF-7对照组比较;b: P < 0.05,与MCF-7R对照组比较 图 3 Western blot检测两种细胞经各种处理后Bim蛋白表达
2.4 比较 MCF-7和MCF-7R两种细胞中PI3k/AKT及MAPK/Erk两条信号通路的活化程度及GPER的差异

Western blot检测结果显示:在他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中,总的GPER蛋白较MCF-7未发生明显变 化,但膜上的GPER表达较MCF-7明显升高[(0.453± 0.032) vs (0.125±0.011),P < 0.05],且p-ERK(0.382±0.024)和p-AKT(0.118±0.010)的表达量较MCF-7细胞的p-Akt(0.081±0.009)和P-Erk(0.034±0.005)也明显增加(P < 0.05),见图4

A:Western blot检测p-AKT和p-ERK;B:Western blot检测总GPER和膜上GPER 1:MCF-7;2:MCF-7R 图 4 Western blot检测两种细胞中P-AKT和P-ERK的表达及GPER的表达
2.5 MCF-7R中Bim蛋白表达量受MAPK/ERK信号通路的影响

MCF-7R分别经:无水乙醇、TAM、U0126+TAM、LY94002+TAM处理后。检测耐药细胞MCF-7R各处理组中Bim的表达水平。半定量分析结果:对照组(0.225±0.020),TAM组(0.183±0.014),U0126+ TAM组(1.236±0.108),LY294002组(0.213±0.018 9),发现先加入ERK抑制抑制剂U0126后再加入TAM实验组,与对照组相比较明显增加,(P < 0.05)。见图5

1: Ctrl; 2:TAM; 3: Uo126+TAM; 4: Ly294002+TAM 图 5 Western blot检测MCF-7R经过不同处理后Bim蛋白表达
2.6 流式细胞术检测细胞凋亡

在MCF-7细胞和MCF-7R细胞经不同药物处理后,流式细胞检测凋亡,比较细胞凋亡率。发现MCF-7 细胞加入TAM处理后凋亡率明显升高[(20.54±1.97) vs (50.20±4.70),P < 0.05];MCF-7R细胞加入相同浓度的TAM后,凋亡率却无明显的变化[(10.55±0.95) vs (14.21±1.06),P>0.05],而在加入TAM之前我们用G15抑制GPER、U0126抑制ERK信号通路、LY294002抑制AKT信号通路,发现加入G15和U0126的处理组细胞凋亡率上升[(45.20±4.02) vs (43.00±3.69),P < 0.05],而LY294002组无明显差异[(18.90±1.79),P>0.05]。

3 讨论

TAM在雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患中广泛应用,相关临床试验已经证实TAM治疗早期ER+的乳腺癌,可使其病死率降低31%,复发率降低47%[12]。然而,约一半长期TAM治疗的乳腺癌患者会失去对TAM的敏感性,最终发生复发转移[13]。现对于TAM的耐药机制现依然不完善。

本课题组在研究GPER在乳腺癌内分泌他莫昔芬耐受中的作用时,发现GPER与EGFR存在密切联系,GPER激活后反作用于EGFR,然后通过PI3K/AKT、MAPK/Erk两条信号通路,发出细胞增殖、凋亡等一系列信号,在TAM抵抗中起到了独特的作用[1, 14, 15]。更有趣的是TAM对于ER,是完全或不完全的拮抗剂,而对于GPER则是激动剂[1]。且本课题组已成功从MCF-7中诱导出TAM耐受细胞MCF-7R,并证实两种细胞的形态变化及对TAM的敏感性。在比较两种细胞对TAM敏感性的研究时发现,MCF-7细胞经过TAM处理之后,细胞的凋亡率明显升高;而在MCF-7R细胞中加入TAM处理后,起凋亡无明显变化;而在MCF-7R中加入TAM之前先加入GPER抑制剂G15后,细胞凋亡率却明显增加[1]

相关研究报道MAPK/ERK和PI3K/AKT两条信号通路与乳腺癌内分泌耐药有关,且抑制信号通路的活化可逆转或改善耐药[1, 16]。有研究发现Bim蛋白在乳腺癌细胞凋亡中期到明显的作用,且在乳腺癌细胞中PI3K/AKT、MAPK/ERK两条信号通路活化抑制Bim的表达[17, 18]。本研究比较两种细胞中Bim的基因及蛋白表达水平,发现MCF-7R中Bim的基因及蛋白水平较MCF-7明显降低。同时验证了前期结果:MCF-7R中GPER总表达量无明显变化,但处于异常活化状态,使PI3K/AKT及MAPK/ERK两条信号通路活化,p-AKT及p-ERK表达量增加。在MCF-7中加入TAM后Bim蛋白表达明显增强,而在MCF-7R中加入TAM后Bim的蛋白表达无明显变化,这或许可以解释Bim是乳腺癌细胞对TAM敏感性指标之一。在MCF-7R中加入TAM之前先加入GPER特异性抑制剂G15,Bim的表达量与只加TAM的MCF-7R相比较明显高表达,可以证明在MCF-7R中GPER对Bim具有抑制的作用。在MCF-7R中加入U0126抑制MAPK/ERK通路、LY294002抑制PI3K/AKT通路后,再加TAM处理,发现加U0126组Bim的表达较其他组明显高表达,这可以证明在乳腺癌耐药株MCF-7R中,MAPK/ERK信号通路可抑制Bim的表达,且细胞经过以上相同处理之后,检测细胞凋亡率。我们发现G15抑制GPER和U0126抑制信号通路MAPK/ERK后,细胞凋亡数量增加明显,说明耐药细胞对TAM的敏感性有明显的改善,且发现Bim蛋白的表达和两种细胞的凋亡率变化趋势相似,这或许可以证明Bim蛋白是TAM促进细胞凋亡的作用蛋白之一。

综上,本研究证实乳腺癌他莫昔芬耐药株MCF-7R中,异常活化的GPER活化下游信号通路MAPK/ERK,抑制促凋亡蛋白Bim的表达,更深入地研究了GPER在乳腺癌内分泌TAM治疗耐受中的作用,但具体调控机制仍不甚明确,需深入研究其关键调控靶点或可为解决乳腺癌TAM耐药提供新的方法。

参考文献
[1] Mo Z, Liu M, Yang F, et al. GPR30 as an initiator of tamoxifen resistance in hormone-dependent breast cancer[J]. Breast Cancer Res, 2013, 15(6): R114.
[2] Catalano S, Giordano C, Panza S, et al. Tamoxifen through GPER upregulates aromatase expression: a novel mechanism sustaining tamoxifen-resistant breast cancer cell growth[J]. Breast Cancer Res Treat, 2014, 146(2): 273-285.
[3] 莫志强, 涂刚, 罗浩军, 等. 人乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐药细胞株的建立及鉴定[J]. 第三军医大学学报, 2011, 33(21): 2256-2259.
[4] Ward A, Balwierz A, Zhang J D, et al. Re-expression of microRNA-375 reverses both tamoxifen resistance and accompanying EMT-like properties in breast cancer[J]. Oncogene, 2013, 32(9): 1173-1182.
[5] Milani A, Geuna E, Mittica G, et al. Overcoming endocrine resistance in metastatic breast cancer: Current evidence and future directions[J]. World J Clin Oncol, 2014, 5(5): 990-1001.
[6] Youle R J, Strasser A. The Bcl-2 protein family: opposing activities that mediate cell death[J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2008, 9(1): 47-59.
[7] Barclay L A, Wales T E, Garner T P, et al. Inhibition of Pro-apoptotic BAX by a noncanonical interaction mechanism[J]. Mol Cell, 2015, 57(5): 873-886.
[8] Viedma-Rodriguez R, Baiza-Gutman L A, Garcia-Carranca A, et al. Suppression of the death gene BIK is a critical factor for resistance to tamoxifen in MCF-7 breast cancer cells[J]. Int J Oncol, 2013, 43(6): 1777-1786.
[9] Dai Y, Grant S. BCL2L11/Bim as a dual-agent regulating autophagy and apoptosis in drug resistance[J]. Autophagy, 2015, 11(2): 416-418.
[10] Miller A V, Hicks M A, Nakajima W, et al. Paclitaxel-induced apoptosis is BAK-dependent, but BAX and BIM-independent in breast tumor[J]. PLoS One, 2013, 8(4): e60685.
[11] Park H K, Lee J E, Lim J, et al. Combination treatment with doxorubicin and gamitrinib synergistically augments anticancer activity through enhanced activation of Bim[J]. BMC Cancer, 2014, 14: 431.
[12] Early Breast Cancer Trialists Collaborative Group (EBCTCG). Effects of chemotherapy and hormonal therapy for early breast cancer on recurrence and 15-year survival: an overview of the randomised trials[J]. Lancet, 2005, 365(9472): 1687-1717.
[13] Hackshaw A, Roughton M, Forsyth S, et al. Long-term benefits of 5 years of tamoxifen: 10-year follow-up of a large randomized trial in women at least 50 years of age with early breast cancer[J]. J Clin Oncol, 2011, 29(13): 1657-1663.
[14] Sjostrom M, Hartman L, Grabau D, et al. Lack of G protein-coupled estrogen receptor (GPER) in the plasma membrane is associated with excellent long-term prognosis in breast cancer[J]. Breast Cancer Res Treat, 2014, 145(1): 61-71.
[15] Elbaz M, Nasser M W, Ravi J, et al. Modulation of the tumor microenvironment and inhibition of EGF/EGFR pathway: novel anti-tumor mechanisms of Cannabidiol in breast cancer[J]. Mol Oncol, 2015, 9(4): 906-919.
[16] Kim M R, Choi H K, Cho K B, et al. Involvement of Pin1 induction in epithelial-mesenchymal transition of tamoxifen-resistant breast cancer cells[J]. Cancer Sci, 2009, 100(10): 1834-1841.
[17] Lv Y, Song S, Zhang K, et al. CHIP regulates AKT/FoxO/Bim signaling in MCF7 and MCF10A cells[J]. PLoS One, 2013, 8(12): e83312.
[18] Periyasamy-Thandavan S, Takhar S, Singer A, et al. Insulin-like growth factor 1 attenuates antiestrogen- and antiprogestin-induced apoptosis in ER+ breast cancer cells by MEK1 regulation of the BH3-only pro-apoptotic protein Bim[J]. Breast Cancer Res, 2012, 14(2): R52.
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201503193
中国人民解放军总政治部、国家科技部及国家新闻出版署批准,
由第三军医大学主管、主办

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朱 庆,伍俊仪,袁 杰,杨海兵,陈茂山,杨光伦
Zhu Qing, ,Wu Junyi, Yuan Jie, Yang Haibing, ,Chen Maoshan, Yang Guanglun
新型雌激素受体GPER在乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药中的作用及机制
Role of G protein-coupled estrogen receptor in tamoxifen-resistant breast cancer MCF-7 cells
第三军医大学学报, 2015, 37(22): 2249-2254
J Third Mil Med Univ, 2015, 37(22): 2249-2254.
http://dx.doi.org/10.16016/j.1000-5404.201503193

文章历史

收稿:2015-03-30
修回:2015-04-07

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